細胞治療の江湖では、急性髄系白血病（AML）はかじりにくい硬骨質のままだった。特に再発や難治（rrAML）の患者は、通常の化学療法の道が狭ければ狭いほど、曙光である造血幹細胞移植（HSCT）を望んでいるが、患者には「緩和」状態への先進化が求められている。

これは死の循環のようなものです。この船を「移植」したいが、乗船のチケットは「緩和」であり、あなたが手にしている「化学療法」のカードはこの効果を出せない。そこで、他の血液腫瘍分野で活躍している「細胞キラー」CAR-Tに目を向けた。

01.理想は豊満：“通用する”ラブキラーを作る

患者自身のT細胞（自家CAR-T）を直接使ってrrAMLに対処することは、効果がずっと理想的ではない。原因は簡単で、複数の化学療法の「爆撃乱爆」を経て、患者の体内のT細胞はすでに「疲れた師」であり、戦闘力は大いに割引されている。

したがって、より優れた考え方の1つは、健康ドナーのT細胞を用いて、「すぐに取ってすぐに使う」汎用型CAR-T（異体CAR-T）を作ることである。これは予備役から直接装備が精巧で精力的な特殊部隊を派遣してきたようなものだ。

しかし、この「傭兵軍」には2つの致命的な問題があります。

（1）敵も味方も区別しない（移植植物抗宿主病、GvHD）：患者の健康組織を攻撃する可能性があるが、結局は「原装」ではない。原生的なT細胞受容体（TCR）をノックアウトしなければならない。それは、走り回らないようにするための「ホームナビゲーションシステム」を取り壊すことに相当する。

（2）友軍に誤傷（免疫拒絶）される：患者自身の免疫システムはこの外来部隊を侵入者と見なし、群がって攻撃する。その身分標識であるHLA-I類分子をノックアウトしなければならない。患者の「防御システム」が見えないように、「隠れ家」を羽織ることに相当する。

さて、青写真があります：私たちは健康なT細胞に対して“魔改造”を行う必要があります：TCRをノックアウトして、HLA-Iをノックアウトして、更にAML細胞を識別することができるCD 33-CARをノックアウトします。

02.現実はとても骨が折れる：3つのことはどのように一歩ずつ到着しますか？

このような多くの「改造命令」（2つの遺伝子ノックアウト用CRISPR RNP、1つの眠り姫転座酵素mRNA、1つのCAR遺伝子を持つスローウイルスDNA）を、高価なT細胞に一度に効率的に詰め込むことは、大きな工学的課題である。従来のウイルスベクター法は、プロセスが複雑でコストが高く、サイクルが長く、潜在的なセキュリティリスクも伴う。スイッチを押すように、この「遺伝子改造豪華ギフトバッグ」を一度に正確に細胞に送る方法はありますか。

03.MaxCyte登場：「不可能」から「ワンクリック」へ

これはまさにこの応用報告書の中で、ナバラ大学の研究者たちが示した核心的な価値である。彼らが使っているMaxCyte GTx™ 流式電気トランスフェクションプラットフォームは、この「ワンステップ配達」の難題を解決した。それは非ウイルスの方法で、1回の電撃操作の中で、同時に2種類のCRISPR RNP、眠れる美人転座酵素mRNAとCD 33-CAR転座子minicircle DNAの4種類の機能の異なる生体高分子をT細胞に導入することに成功した。

この操作は「速く、正しく、強く」と呼ばれ、その価値は次のように現れている。

•簡単で効率的：遺伝子工学全体のコアステップは1回の電気転移に簡略化され、製造時間を大幅に短縮した。データによると、改造を経て、平均32.4%のCD 33-CAR陽性細胞を得ることができ、69%を超える細胞がダブル遺伝子ノックアウトに成功した。

•細胞フレンドリー：このような「物理的破門」の方法は乱暴に見えるが、実は優しい。改造後のCAR-T細胞は依然として旺盛な増殖能力と理想的な細胞表現型を維持しており、この「電撃療法」によって元気が大きく傷つくことはなく、戦闘力は少しも衰えていない。

•強大な機能：体外細胞毒性試験にしても、マウスモデルにおける体内抗腫瘍活性試験にしても、これらの「一歩先」のCD 33-AlloCART細胞は伝統的な方法で作製した細胞と一致した、強大な腫瘍殺傷効果を示した。

•シームレスな拡大：最も重要な点は、このテクノロジーが良好（りょうこう）のscalability(拡張性)。2 x 10 8310細胞の小試験規模であれ、5 x 10 8311細胞の臨床関連生産規模であれ、細胞の改造効率、表現型、機能は高度に一致している。これは、この技術が実験室から臨床へ、商業化生産を実現する道が円滑であることを意味している。最終的に、5 x 10 8311の開始細胞は、3 x 10 8312を超える精製後CAR−T製品を得ることができる。

04.まとめ：MaxCyteを選択し、効率を選択する

rrAMLという頑固な敵に対して、科学者たちは精密な「汎用型」CAR-T細胞を設計した療法。MaxCyteの電気転写技術は、この神兵利器を鍛造する鍵となる「智造プラットフォーム」となった。それは非ウイルス、一歩式、規模化可能な方法を用いて、複雑な細胞工学送達の難題を解決し、「すぐに取ってすぐに使う」CAR-T療法を現実に一歩近づけた。

これは技術の検証だけでなく、苦境にあえぐAML患者のために、新たな希望の灯をともしている。

*本文は「拓普百奥」微信公衆番号から転載し、著者：宇文数学

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▍MaxCyteについて：

MaxCyteは1999年に設立され、米国メリーランド州に本社を置く細胞工学電気穿孔技術ソリューションプロバイダです。そのExPERTを利用する™電気転移プラットフォームは、大規模な細胞の工程化処理を効率的、安定的に実現でき、早期研究、臨床開発から商業化生産までの全段階の細胞転移需要を満たし、抗体蛋白発現、ワクチン開発、遺伝子編集及び細胞と遺伝子治療などの分野に広くサービスしている。――MaxCyte中国南区総代として、上海昊拡はあなたの研究開発、臨床から商業化生産までの異なる段階で、あなたの細胞トランスフェクション量の需要を満たす専門的なソリューションと技術サポートを提供します。

▍上海昊拡について：

上海昊拡科学器材有限公司は2019年に設立され、上海に本社を置き、実験室設備/消耗品及び分析機器の専門サービス業者である。会社は生物、医薬、物性検査、化学分析、食品、工業生産などの関連分野の顧客に国内外のハイテク専門設備及び技術コンサルティングサービスを提供することに力を入れている。