薬物治療の有望な標的としてのマクロファージ

自食およびその失調は神経退行性疾患および癌において発見されている発揮重要な役割を果たしているため、この過程で新たな治療標的が発見されたことは将来性のある薬物治療法となっている。マクロファージは細胞ストレス下で損傷したタンパク質と細胞器を分解して回収する制御プロセスである1，2。被マクロファージと呼ばれる嚢バブルパス破壊と標識された細胞成分の周囲に二重膜を形成する行う組み立て1。マクロファージ嚢胞はその後リソソームと融合し、リソソーム加水分解酵素の分解のためにその内容物を伝達する。

マクロファージは、栄養飢餓への適応、損傷した細胞内タンパク質および細胞器の除去、細胞発育、老化防止、微生物の除去、細胞死、腫瘍抑制、抗原提示など、多種の複雑な生理的および病理的生理的作用を有する。2。ミトコンドリア分裂はミトコンドリアに対するマクロファージの選択的分解である3。このプロセスは通常、以細胞損傷やストレス後の欠陥のあるミトコンドリアを除去する。

材料

• PC12ヒト神経母細胞腫細胞系（ATCC）

• 384 オリフィスプレート（グレイナー）

• 細胞id®マクロファージ検出キット（ENZO 生命科学）

• オレンジミトコンドリア染料

• ホーヒスト 33342

• ImageXpress® ピコ自動化細胞イメージングシステム（分子装置）

• CellReporterXpress の データ収集と分析ソフトウェア（分子装置）

優位

マクロファージ過程に対する定量化合物の影響

核マーカーを用いて細胞を分割し、検出とキャラクタリゼーションが小さいの目標物

自動イメージングを使用した信頼性の高い統計結果の確保

自動細胞イメージングを用いたマクロファージ粒子の検出と定量

マクロファージへの影響の評価

この応用説明ではああ、評価しましたImageXpressピコ自動化された細胞イメージングシステムによるマクロファージ粒子の検出と定量の効率。PC12ヒト神経細胞腫細胞系は検出開発モデルとして用いられる。細胞を 6，000 個細胞/穴への接種384オリフィスプレート、インキュベーション48時間です。自食への影響を評価するために、使う異なる濃度のクロロキンまたはビラパミで細胞を処理する48時間です。ベラパミいい誘導自食、クロロキンいい粒子蓄積を引き起こすマクロファージの分解を抑制する。化合物処理後、使用細胞id®じこしょくけんしゅつキットそうかつ細胞を染色してに示すトレースマクロファージ。また、蛍光ミトコンドリア染料を用いてミトコンドリアを検出し、ホエヒスト同定細胞核（濃度それぞれ 0.2 μM和 1 μM）。使用する組み合わせ20Xまたは40X対物レンズのImageXpressピコシステムと3つの検出チャネル（FITC、TRITC の和青色蛍光）細胞に対してイメージングを行う。に20X対物レンズ下の穴ごとに画像を収集し、40X対物レンズ下各穴収集2-4画像を1枚作成して、信頼性の高い統計結果を確保します。使用するCellReporterXpress の画像収集及び分析ソフトウェアにおけるマクロファージ又はミトコンドリア応用方案は画像を分析する。

図 1：マクロファージ検査。上の図は、過ぎるマクロファージ誘導剤クロロキン（30 pM）を処理し、使う用いる細胞id染料染色のPC12細胞の代表的なマクロファージ画像と分析マスク。にCellReporterXpress のソフトウェアでは、点分割を用いてマクロファージ粒子を識別する。細胞核表示青、ミトコンドリア表示オレンジ表示緑。下図表示使い果たす未処理細胞をオレンジミトコンドリア完全性染料で染色する。ミトコンドリア検出用の画像と分析マスク。

これらのアルゴリズムは以検出と特性評価が小さいの目標物細胞質中のマクロファージやミトコンドリアのように、細胞を分割するために核マーカーを使用しながら。マクロファージ検出のための定量検出粒子の総数または平均数、粒子（サブ細胞オブジェクト）の総面積または平均面積、および強度を含む。クロロキン（30 μM）処理後細胞の代表的な画像と分析マスクを図のように示します1を参照してください。検測るクロロキンとベラパミ処理後細胞の濃度反応を評価し、EC50値を入力します。総マクロファージ数のデータによると、クロロキン及びビラパミ処理使細胞マクロファージレベルがそれぞれ増加4.6倍和3.3倍数（EC50値はそれぞれ4.0和3.6 μM）。

結論

この方法と細胞idせんりょう結合マクロファージ粒子を検出するために使用することができ、マクロファージプロセスに対する化合物の開発と定量の影響を検出するために使用することができる。

参考（さんこう）文献

1. 1. 三島、N;Komatsu, M. (2011年).自食症：細胞や組織の再生。細胞 147: 728–41

2. 2. 三島、N; (2007).自自自自自自自自自自自自自自自自自自自自自自自身自自自自自自自自自自自自自自動自自自自自身自自自自身自自身自自自