プロフィール

細胞数、繁殖、健康、融合度、細胞毒性を監視する多種の生物学的応用に対して、行う必要がある無マーカー細胞検出。これらのアプリケーション必要有効で信頼性の高い透過光を使用する（TL）細胞を定量し、さまざまな細胞反応および形態を評価するための正確な分割を提供する画像化および分析機能。さらに、高コントラスト透過光イメージングと蛍光標識イメージングの組み合わせは、細胞ベースの検出の多くに対して分析とても重要なことです。

MetaXpress の 6.5カスタムモジュールエディタのTL細胞分割アルゴリズムは透過光を用いた細胞のイメージングであるおよび定量的な最適化かつ信頼性の高い分析アルゴリズム。このアプリケーションの説明では、TL細胞分割の実用性と正確性。透過光中の全細胞計数と蛍光染色の細胞核計数を比較することにより分析し、定量するCHO社和ヘラ細胞のアルゴリズム（図 1）。

方法

将（しょう）CHO社和ヘラ細胞希釈液を黒色、底部に接種する透明な96オリフィスプレートでは、プレートの上から行ルーティング開始（一番上の行の中穴ごと20，000個の細胞）を選択します。各細胞を1：2の比率は微孔板の中を下に進む希釈，6個の複素穴。細胞培養24時間後、37℃、5%のCO2 の培養箱に使用するホーヒスト 33342細胞核染料による細胞染色30分です。次に、4%ポリホルムアルデヒドを用いて細胞を固定し、DPBS の2回洗濯する。通過ImageXpressマイクロ®高内包イメージングシステムとMetaXpress のソフトウェアは細胞をイメージングする。使用する10xプランフロール対物レンズは1つの視野をイメージングして、この対物レンズは正確に最大を捕獲することができます1500個の細胞。透過光と青色蛍光蛍光チャンネルは画像を撮影し、露光時間はそれぞれ15 MS和35 MS。

優位

使用する
透過光イメージング対ターゲット分割とカウントの監視透過光下の細胞増殖

複数の解析方法の使用評価TL細胞分割アルゴリズムの効果

複数の細胞タイプとサイズの量子化ツール
定量分析ツール

図 1：透過光を解析するための設定撮影のヘラ和CHO社細胞画像のカスタムモジュールです。 使う用いるホーヒスト 33342細胞核染料は細胞を染色する。使用する青色蛍光チャネルととうかこう（TL）行う細胞イメージング、設定モジュールをカスタマイズして、透過光イメージングと細胞核蛍光イメージングに基づいて細胞を分析し、定量します。

カスタムモジュールエディタ(Custom Module Editor)設定TL細胞分割アルゴリズム

正確な細胞分割は、透過光によって捕捉された細胞を定量する上で非常に重要である。ためにTL細胞分割選択された細胞アルゴリズムAいい正確に分割和認識ヘラ和CHO社細胞 （図 2）。他にも設定があります。細胞アルゴリズムBまたは細胞アルゴリズムC可（か）それぞれ小細胞または大細胞の分析に使用。解析中モジュール内設定を行う合計面積をフィルタより小さい150 pM2の細胞（図 3）。これ個の設定可（か）以取り囲んだ小さな死細胞を避けるためにとみなす生細胞を計数し分析する。さらに、設置された細胞核計数アルゴリズムは以正確ていりょうヘラ和CHO社のさいぼうかく 4）。

結合透過光下の細胞計数と蛍光細胞核計数

使用するTL細胞分割アルゴリズム設定のカスタムモジュールを正確に分割ヘラ和CHO社さいぼう 6）。透過光中の総細胞数と細胞核数には統計学的な違いはなく、表明（ひょうめい）TL細胞分割アルゴリズムの精度（図 7）。細胞数の他に、TL細胞分割アルゴリズムは、複数の生成も可能であるデータ細胞反応と細胞形態の異なる特徴（図 5）。例えば、細胞と細胞内を生成することができるターゲットの合計数と平均数、面積、強度、形状、高さ、幅および各種その他異なる読取り。使用するフィルタオプション包囲された死細胞を取り除くことでさらに最適化これプロセス、および減算少生細胞または全細胞を用いた染色の必要性。さらに、細胞核染色と計数細胞チェック象アルゴリズムの使用は、透過光画像を分析することによって。

図 2. 将（しょう）TL細胞分割アルゴリズムを選択したヘラ細胞透過光画像。カスタムモジュールエディタで、以通過設定ソース波長と代表細胞型のペアを選択TL細胞分割アルゴリズムを構成する。細胞アルゴリズムA可（か）以効果的に識別画像中のヘラ和CHO社細胞。

図3. TL細胞分割重畳和フィルタ設定フィルタ後重畳された比較画像。 最小面積をに設定150 μm2以フィルタリング死細胞。

図 4. 使用する細胞照合象分割モジュールペア蛍光細胞核画像行う数を数える。細胞照合細胞に基づいて定量し、使う用いるホーヒスト 33342細胞核に対して行う染色。局所的な背景パラメータを超える最小幅推定値と最大幅推定値と強度を最適化し、正確にする認識すべて細細胞核細細胞核は青色（左図）、分析しゃへい黄色（右図）です。

図5. ヘラ細胞の代表的な画像、設定カスタムモジュール画像解析方法。 青しゃへい代表通過TL細胞分割アルゴリズムの使用TLフィルター覆い隠すマスキングフィルタ発見された細胞、黄色は計数による照合を表す象アルゴリズムによって発見された細胞核。カスタムモジュールの必要な測定項目は、「測定」タブで実行できます。設定。要測定する対象は定義ためにいい通過TL細胞分割アルゴリズムマスキングするオブジェクト、カウントチェックの選択象覆い隠す隠す各測定ターゲットという特性があります。

図6. ヘラ和CHO社細胞の画像とアプリTL細胞分割カスタムモジュール最適化後の画像解析結果。青色蛍光細胞核を青色で表示（左），画像分析中マスク黄色（右）、光の中の細胞を透過してライトブルーマスクを選択して設定できます。10xプランフロール対物レンズはImageXpressマイクロシステム上で画像をキャプチャし、新しいTL細胞分割アルゴリズムによって構成されたカスタムモジュールは、画像を解析します。

図 7. に基づいてTL細胞分割と核計オブジェクトを数えるモジュール比較ヘラ和CHO社細胞の総細胞数。 押す1：2の割合で細胞を希釈し、穴ごとに20，000個の細胞の濃度が始まる。

結論

MetaXpress のカスタムモジュールエディタのTL細胞分割アルゴリズムは以多種の細胞の種類と大きさを効果的に定量し、分析する。ImageXpress®マイクロ コンフォカルターンテーブル共焦点高内包イメージング解析システムがサポートする最適分割機能は、蛍光団とは無関係の細胞形態学透過光画像を用いた細胞の定量いい研究者の検出能力をより柔軟にする。これアプリケーション説明説明する方法はTL細胞分割アルゴリズムは、増殖、細胞毒性研究及びトランスフェクションを含むがこれらに限定されない、様々な検出に使用することができる。