一、サンプル移転：汚染と損失を避ける

試料をサンプラーから処理容器（例えばシャーレ、遠心管）に移す場合、同時に外部汚染と目標微生物の損失を防ぐ必要がある：

無菌環境操作：

移送は生物安全キャビネット内で行い、操作前にサンプラーサンプリングヘッド、容器表面及び操作者の手部を75%アルコール消毒する。無菌ストロー、ピペット（ガンヘッドは滅菌する必要がある）を使用して、容器外壁などの非無菌領域に接触しないようにします。

誤解の提示：開放環境で操作すると、空気中の雑菌がサンプルに混入し、コロニー数が虚高になり、特に低濃度サンプルに顕著な影響を与える。

サンプリング液の十分な溶出：

衝突式、篩孔式サンプラーについては、サンプリング後に無菌溶離液（例えば0.85%無菌生理食塩水、リン酸塩緩衝液PBS）でサンプリングヘッド（少なくとも3回）を繰り返し洗浄し、付着した微生物が溶離液に完全に入ることを確保する必要がある、渦振動は1 ~ 2分間（回転数2000 ~ 3000 rpm）、微生物が集まる菌団を打破し、分散度を高める。

二、サンプル希釈：希釈倍数の正確性を保証する

サンプル中の微生物濃度が高い場合は、計数可能なコロニー数（30 ~ 300 CFU/皿）を得るために勾配希釈が必要であり、希釈プロセスの誤差は結果の正確性に直接影響する：

希釈液と容器：滅菌の勾配希釈管（例えば10 mL容量の螺旋蓋試験管）を使用し、9 mLの無菌希釈液（誤差は≦±0.1 mL必要）を予備装填する、混同を避けるために、希釈倍数（10⁻¹、10⁻²など）を明確に表記する。

操作仕様：

移液時にストロー/ガンヘッド先端が液面下1 ~ 2 cmに接触し、気泡を吸入しないように確保する、

高濃度から低濃度へ希釈する場合、1ステップごとに均一に混合し（試験管を手で10〜15回こする）、均一に希釈することを確保する。

同じ希釈倍数を2 ~ 3つの平行サンプルにして、ランダム誤差を減らす。

三、培養と計数：培養条件を制御し、計数基準を規範化する

微生物の成長は培養条件の影響を大きく受け、厳格にパラメータを統一する必要がある：

培地の選択と製造：

目的の微生物タイプに基づいて培地（例えば細菌用栄養寒天の検出、真菌用ジャガイモグルコース寒天PDA）を選択し、培地は徹底的に滅菌（121℃高圧蒸気滅菌20分）しなければならず、pH値は要求（細菌pH 7.2 ~ 7.4、真菌pH 5.6 ~ 5.8）に符合し、栄養欠陥や酸塩基の不調による微生物の成長不能を回避する。

培養条件制御：

温度：細菌36±1℃、真菌28±1℃、恒温培養箱は毎日温度（誤差≦±0.5℃）を校正する必要がある、

時間：細菌培養48±2時間、真菌培養72±2時間、培養短すぎによるコロニー漏出計または長すぎによるコロニーの重複を避ける。

カウント規則：

選択コロニー数が30 ~ 300 CFUの平板計数（30未満では結果誤差が大きく、300以上ではコロニーが重なりやすい）、

同一希釈度の平行平板コロニー数の差が1倍を超える場合（例えば、10オスミウム希釈度平板コロニー数が20と50）、再検査が必要である、

計数時には目標微生物と汚染菌を区別する必要がある（コロニー形態、染色鏡検査支援により判断可能）。

四、品質制御：全過程で信頼性を検証する

ブランク対照実験：

各ロットのサンプル処理時に、サンプリングブランク（サンプラーは空気を採取せず、溶離液のみでサンプリングヘッドを洗い流してから培養）と操作ブランク（無菌溶離液を直接接種培養）を設置し、ブランクコロニー数>5 CFUであれば、汚染が存在することを説明し、再実験が必要である。

陽性対照と回収率の検証：

定期的に既知濃度の標準菌液（大腸菌、黄色ブドウ球菌など）を用いてサンプリングをシミュレーションし、回収率を計算する（回収率は70%~ 130%の間でなければならず、そうでなければサンプラ効率または処理フローを検査する必要がある）。

計器較正：

サンプラは定期的に流量（誤差≦±5%）を校正し、流量の不正確によるサンプリング体積の偏差を避ける必要がある、

移液銃、培養箱などの設備は毎年計量認証を経て、パラメータが正確であることを確保しなければならない。