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シングルアンチニースタブにおける高スループットDSF高速解析熱安定性Tm法の応用
日付:2025-02-14読み:0
NISTmAbは、**タンパク質キャラクタリゼーションの新技術を開発するための標本として使用することを目的とした広範なキャラクタリゼーションモノクローナル抗体である。本応用文献では、SUPR−DSFを用いてNISTmAbの差動走査蛍光法DSE)の教示を取得し、開洛結果を寿示走査熱量法DSOと比較した。SUPR-DSEはNISTAbの2つのドメイン、CH 2(690 C.CH 3(830()と高解離性蒸気度のFABドメイン(94 oC)をすべて解凍した[1]。また、測定されたTm値は文献の報告と一致している。これらの結果は、SUPR−DSFを適用することで、高品質のタンパク質安定性情報を容易に得ることができることを証明している。

結論:
Protein Stable社のSUPR-DSFは、タンパク質内因性蛍光のピーク変位を検出し、鎖解離温度を迅速かつ正確に測定することができる。結果は、SUPR−DSFがFabドメインのような超高鎖解離温度(94 0 C)を含む正確な鎖解離温度を得ることができることを示している。これはまた、内因性蛍光法に基づくSUPR−DSFがDSCと一致する結果を得ることができることを検証した。384オリフィスプレートを用いた試験の利点は、フラックスを高め、利便性を高めると同時にサンプルの消費を低減することである。
メソッド:
濃度1 mg/mlのNISTmAbをpH 6のL-ヒスチジン緩中液中で調製し、それぞれ384孔LPCR微孔板に加え、各孔の使用量は104 Lであった。分注後、微孔板を60秒間遠心分離した後、透明ゴム膜で密封した。SUPR−DSFにおける連続昇混合プログラムを、150 C〜105 oCの蛍光チャネル、蛍光スペクトルから得られたデータを毎分10 Cの昇温速度で測定し、BCM法により計算処理を行い、スペクトルオフセットを量子化するように設定した。BCMのデータは温度の関数として処理され、1次導関数に変換されて分析されます。導関数のピークから解鎖温度を計算する。すべてのサンプルの方法と結果を得ることができます。