神経科学研究において、安定的で信頼性の高い動物モデルは生命メカニズムの探索と治療戦略の検証の基礎である。マウス開頭手術は多種の脳科学研究モデルを構築する核心技術として、その操作の規範性と正確性は極めて重要である。成功した手術は、動物の損傷を最大限に軽減するだけでなく、後続の実験データの正確性と再現性を保障する鍵でもある。

開頭手術をマスターするには、脳の解剖構造の深い理解と精密な操作技術の繰り返しの鍛錬が欠かせない。実際の運用では、多くの研究者が次のような典型的な問題に直面しています。

✅ どのようにして頭蓋骨を安全に磨耗除去し、脳組織の完全無傷を確保するのか。

✅ 頭蓋窓ガラスを固定する際、固定強度とイメージング視野の完全性をどのようにバランスさせるか。

✅ 術中の無菌操作と術後の動物看護、どのような重視しなければならない細部がありますか？

本文は経典のマウス開頭手術の流れをめぐって展開し、明確なステップのデモと重要なポイントの解析を通じて、システムはこの技術の核心方法を整理する。「二光子蛍光イメージングマウス調製手術」の最初の編として、本文は読者の手術基礎の打ち固めを支援することを目的としている。将来的には、GRIN Lensインプラント、脊髄開窓、二光子とEEG電極の埋設結合など、より多くの精密な手術操作を次々と詳しく理解し、科学研究の道で絶えず技術を精進することに付き添うことになります。

　　ご案内：ご覧いただいた感想を考慮して、手術画面の一部を柔らかく処理しましたので、安心してご覧ください。

　　

　　パート.01術前準備

1.手術器具：2本の精密ピンセット、1本の双頭マイクロスパチュラ、1本のスプリングカッター。

2.実験消耗品：実験に必要な消耗品と生理食塩水（1%セフトリアムシナトリウム）を準備する。

3.器械消毒：術中に使用するすべての器械またはインプラントは使用前に消毒処理が必要で、75%エタノールで消毒することができ、条件のあるものは定期的に高圧滅菌することができる。

4.手術台の消毒：手術台は使用前に75%エタノールを用いて拭き消毒し、手術台は無菌布、清潔な吸収マットまたはタオルを敷くべきで、手術が終わるたびにこれらの材料を交換しなければならない。

　　第02部麻酔、固定

1.マウスを麻酔チャンバー内に入れて誘導麻酔を行い、ガス流量と麻酔目盛りは実験室のエア麻酔機に基づいて設置した。マウスに明らかな呼吸低下、四肢弛緩が現れた場合、マウスは麻酔状態に入ったことを示した。

2.麻酔後のマウスを脳立体定位器に固定し、麻酔を維持し、手術中はマウスの呼吸を注意深く観察した。

　　第03部脱毛

1.エリスロマイシンアイクリームをマウスの目に均一に塗布し、マウスの目を完全に覆い、目が外に露出しないように使用する。

2.医療用綿棒を用いて脱毛クリームをつけ、毛髪の生える方向に逆らって毛髪の根元に均一に塗布し、約2分後に綿棒で拭き取って頭の毛髪を脱いだ。

3.医療用綿棒を用いて生理食塩水をつけ、マウスの頭部に残った脱毛クリームをきれいに洗浄した。

4.ヨードボルトを使用して脱毛した皮膚を拭く。

第04部頭蓋骨の露出と除去

1.スプリングカットで頭皮をカットします。

2.露出した頭蓋骨上の粘膜と2つの筋肉接続部の余分な脂肪をすべて除去する。

3.マイクロ二頭スパチュラを用いて頭蓋骨表面の残留粘膜、結合組織などをスパチュラ除去する。

4.耳球を持ち、頭蓋骨表面を完全に乾燥させる。

　　第05部に栓を

1.ウイルス注射孔または位置決め部位を円心とし、精密ピンセットを持って適切な規格の円形ガラス片を頭蓋骨表面に置く。

2.頭蓋骨ドリルの速度を低級に調整し、ガラス片の大きさに沿って1周研磨した後、耳洗いボールを使用して砕屑を軽く吹き飛ばし、研磨範囲がガラス片の大きさに完全に合うまでこの操作を繰り返し、回転速度を中高級に調整し、研磨を続けた。

3.粉砕頭蓋骨に亀裂が発生した場合、頭蓋骨ドリルの回転速度を低速に調整し、引き続き粉砕し、頭蓋骨窓全体が完全に破断するまで繰り返し操作する。

4.精密ピンセットを持ち、頭蓋骨片をゆっくりと外した。

　　第06部骨屑を掻き取る

精密ピンセットを用いて頭蓋窓の側面から針を下ろし、周囲の砕骨片を軽く引き出し、頭蓋窓の周囲に完全に破片がなくなるまでこの操作を繰り返した。

第07部スライドを取り付ける

1.洗浄後のガラス片を精密ピンセットを用いて露出した脳組織に軽く挟持し、ピンセットでガラス片を軽く押し、ガラス片を研磨した頭蓋面にぴったりと貼り合わせ、頭蓋の下にはめ込む。体式顕微鏡の下でガラスの下に気泡があるかどうかを調べ、気泡があれば、ガラスを開けて生理食塩水を滴下し、気泡がなくなるまでこの操作を繰り返した。

2.吸湿紙の先端を用いてガラス外に滲出した余分な液体を吸引し、耳洗いボールを用いて頭蓋骨表面を軽く乾かし、外から内への順序で、小さなブラシを用いて少量の生体組織糊をつけ、縁皮膚、頭蓋骨全体、頭蓋窓縁に塗布した。

3.生体組織糊が乾くのを待ってから、歯科用塗布棒に406糊をつけて取り、塗布範囲は上で、406糊が乾燥するのを待っている。

4.吸湿紙の先端を用いて502と歯科セメントの混合物をつけ、頭蓋窓の縁に少量何度も塗布し、全体の操作中にセメントをガラスの中央に流すことを禁じる。

第08部ヘッドピースの取り付け

1.502接着剤を用いて均一な歯科セメントを溶解混合し、露出した頭蓋骨を薄く均一に覆い、露出した頭蓋骨を完全に閉鎖し、歯科セメントが乾いていない時にヘッドピースを取り付ける。

2.歯科用セメントを用いてヘッドとの隙間または接続の脆弱性を十分に埋め、ヘッドの安定性を強化する。

3.歯科セメントが乾くのを待ってから、マウスを保温箱に入れ、マウスが目を覚ますのを待っている。

第09部術後ケア

1.動物に良好な生存条件を提供し、単ケージ飼育を提案し、飼料をケージ内に撒いて、動物が食事をしたりけんかをしたりする時に頭材に摩擦して衝突し、視野がずれたり頭材が落ちたりするのを避ける。

2.術後1〜7日、動物にセファロスポリンナトリウム溶液を1日1回腹腔に注射した。