illumina NextSeq 500/550 v 2.5シーケンシングキット

製品名：illumina NextSeq 500/550 v 2.5シーケンシングキット（150 cycles）現物供給

製品番号：20024904

製品ブランド：illumina/米国インメナ

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llumina二世代シーケンシング技術、合成しながらシーケンシング（SBS）、広く採用されている新世代シーケンシング（NGS）技術であり、世界の90%以上のシーケンシングデータの生成を担当している。

Illuminaの二世代シーケンシング技術を辺合成辺シーケンシング（Sequencing-by-Synthesis、略称SBS）と呼ぶ。SBSは主に塩基延長、蛍光励起及び信号収集、せん断の3つのステップを含む。この3つのステップは繰り返し、繰り返して行うことができます。循環ごとに1塩基を測定する。何個の塩基を測定したいか（即ち読み取り長さ）、何回循環します。シーケンシングサイクル回数はソフトウェアで設定できます。どのくらいの順序付けが適切なのかは、プロジェクトの性質とニーズに基づいて決定しなければならない。ほとんどの場合、SR実験（シングルエンド配列決定）は1 x 50塩基を測定し、PE実験（ダブルエンド配列決定）は2 x 150塩基を測定する。

1塩基延長

Illumina配列決定試薬に使用されるdNTPの特色は、2つの修飾基、1つの蛍光基、1つの可逆停止基を同時に有する。A、G、C、Tの4種類の塩基はそれぞれ4種類の異なる蛍光基を標識し、それらは異なる波長のレーザー励起下で、異なる波長（すなわち色）の蛍光を放射することができる。蛍光色は塩基種に一対一に対応するため、励起光の波長に応じて塩基を識別することができる。4種類の塩基の終端基は同じである。終端基の存在により、すべてのdNTPは反応時間がどれだけ長く与えられても1塩基しか延長できない。また、この終端基は可逆的であるため、蛍光信号の収集が完了した後、剪断剤でこの終端基を切除し、塩基を自然な伸長可能な状態に戻すことができ、この時に次のサイクルを続け、もう1つの塩基を測定することができる。

可逆終端基技術はIllumina二世代配列決定の大きな特色である。ブリッジPCR技術とともに、Illumina二世代シーケンシングの2つの柱を構成し、安定して高品質のシーケンシングデータを得るために堅固な基礎を築いた。

2信号収集

HiSeqシリーズシーケンサは赤緑2本のレーザー管、2つのカラーフィルタを備えている。これらの2つの組み合わせは、A、G、C、Tの4種類の塩基を励起するためにちょうど4種類の異なる励起波長を形成することができます。

Cluster上に標識された蛍光基がレーザー励起下で発生した信号は、カメラで撮影または走査することで信号を収集することができる。スキャン技術は比較的速く、X 10シリーズに採用されている。FC面積が大きく、上面と下面は別々に写真を撮るので、写真を撮るのにかなり時間がかかります。古典的なHiSeq 2000にとって、1回のシーケンシングサイクルによって生成される蛍光信号は、シーケンシング反応そのものよりも長い時間で写真収集が完了するまでに約40分かかる。

3カット

蛍光信号の収集が完了したら、レーザー光をオフにし、配列決定プライマーの伸長生成物上の塩基で標識された蛍光基と停止基をせん断剤で除去した。2つの修飾基はいずれも切除され、一方では蛍光妨害を除去し、一方では鎖末端の塩基を自然な伸長可能な状態に回復させ、次のシーケンシングに備えている。

合成、励起、収集などの手順を繰り返して、第2の塩基の配列決定を行うことができます。

シーケンシングサイクルは複数回繰り返すことができる。蛍光基の発光効率は減衰し続け、Taq酵素の活性も減衰し続けているため、実際には配列決定サイクル回数は限られており、大きな繰り返し回数はsbs試薬の配合に関係している。シーケンシングの循環回数はソフトウェア設定中に人為的に行うことができ、この繰り返し回数は各シーケンシングフラグメントの読み取り長である。現在、Illuminaプラットフォームの読み取り長は2 x 100 bp、2 x 125 bp、2 x 150 bp、2 x 300 bpなど多種あり、そのうち2 x 150 bpは広く使用されている。

シングルエンドシーケンシング：シングルエンドシーケンシング（Single-read）はまずDNAサンプルを断片化処理して200-500 bpの断片を形成し、プライマー配列はDNA断片の一端に接続し、その後、末端にジョイントを加え、断片をflow cellに固定してDNAクラスタを生成し、オンラインシーケンシングシングルエンド読取配列を測定する。

両端シーケンシング：両端シーケンシング（Paired-end）方法とは、測定すべきDNAライブラリーを構築する際に両端の継ぎ手にシーケンシングプライマー結合部位を加え、*輪シーケンシングが完了した後、*輪シーケンシングのテンプレートチェーンを除去し、読み出しシーケンシングモジュール（Paired-End Module）を用いて相補チェーンの元の位置での再生と増幅を導き、第2輪シーケンシングに用いるテンプレート量を達成し、第2輪相補チェーンの合成シーケンシングを行うことを指す。

ゲノムライブラリーとは、ある生物の全ゲノムDNAを一定の長さに切断したDNA断片をあるベクターにクローン化した集合を指す。ゲノムライブラリーはDNA源に基づいて核ゲノムライブラリー、葉緑体ゲノムライブラリー及びミトコンドリアゲノムライブラリーに分けられる。ゲノムライブラリー構築時の遺伝情報ドナーはゲノムDNAであるため、発育時期及び組織器官特異性はなく、1つの*のゲノムライブラリーにはゲノムDNA上のすべてのコード領域及び非コード領域配列のクローンが含まれている、

ゲノムライブラリー（Genomic Library）は、ある生物ゲノムのすべての遺伝情報をクローンベクターを介して受容体菌クローン集団に保存することを定義する。この集団はこの生物のゲノムライブラリーである。

20024904 illumina配列決定キットv 2.5現品割引

製品名：illumina 20024904 NextSeq 500/550 v 2.5シーケンシングキット（150 cycles）

製品番号：20024904

製品ブランド：illumina/米国インメナ

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