iQueフィルタPLUS

米国Inlicyt社のiQue Screenerシリーズ超高スループット懸濁細胞/微小ビーズスクリーニングシステムはInlicyt社の主な製品であり、流動式の原理を用いて懸濁細胞と微小ビーズを分析し、高内包スクリーニング装置であり、96ウェルプレートと384ウェルプレートを分析でき、HD型は1536ウェルプレートを分析でき、検出速度と総合的で包括的な分析ソフトウェアを持っている。iQue Screenerシリーズには3種類のモデルがあります：iQue Screener、iQue Screener HD、iQue Screene

真のソリューション----懸濁細胞/マイクロビーズ高流束スクリーニング
高内包スクリーニングは豊富なデータを提供することによって薬物の開発を促進し、薬物開発過程の通常の流れとなっている。しかし、高内包スクリーニングは壁貼り細胞に限られており、より多くの重要な研究分野に触れることはできない。米InliCitはiQue Screenerスクリーニングシステムを発売し、懸濁細胞と微小ビーズを分析し、現在のスクリーニング実験に迅速な高内包の実験データを提供する

• 抗原結合と交差反応のデータを同時に取得することにより、抗体開発研究からより良いハイブリドーマ情報が得られ、スクリーニング目標はすべてそれらの自然な構造状態に維持される。
• より多くの体外毒性を確保するための予測結果は、毎秒数千個の独立細胞の健康特性を分析する全自動、多終点の実験設計によって得ることができる。

統合されたソリューション

計器、ソフトウェア、キットのスクリーニングソリューションを統合し、研究者がスクリーニングの速度と効率で懸濁細胞を分析できるようにした。
iQue^商標フィルタ＃フィルタ＃実行方法
iQue^商標このような独特な注入方法は、正確な追跡を確保し、交差汚染zuiを小さくするために、細胞または他の内包物を連続的、空気間隔で搬送する方法で、微多孔質プレートからフローサイトメータに輸送することができる。zuiの最終的な検出結果は数時間ではなく数分しか必要とせず、解読しやすいヒートマップ（heat map）形式で微孔板に基づく実験結果を形成することができる。


iQue^商標フィルタ＃フィルタ＃の特徴
より高い実験効率

• 数ヶ月ではなく、数日以内にライブラリをスクリーニングします
• 注入体積は1µLまで低減でき、試薬のコストを削減できる
• 3 min内に96ウェルプレートを運転でき、12 min内に384ウェルプレートを運転できる
• アームや他の自動作業ユニットと統合可能
• 互換性のある細胞、微小ビーズ、およびそれらの混合物

より多くの生理的依存性

• 異なる細胞の混合物を分析し、単一の細胞データを読み取ることができる
• 4つの蛍光チャネルを用いた多重読取
• 非標識標的物の寸法及び粒度を検出可能

より安定した実験結果

• 6桁の検出範囲により、感度と信頼性の高い実験結果を提供
• 10000個の独立した細胞で、穴ごとのより良い統計データを得ることができます

より使いやすい

• 完全なワークフローのサポート
• リアルタイム動的解析
• インスタントレポートの生成

超高スループット、強力なヘルパー
アプリ
抗体開発（Antibody Discovery）

• ハイブリドーマスクリーニング（Hybridoma Screening）
• 系統間の交差反応性の決定（Determining Species Cross-Reactivity）
• 抗体分泌細胞系の生産性を評価する（Assessing Productivity of Antibody-Secreting Cell Lines）
• ヒト生殖細胞IgGバンク（Screening a Human Germline IgG Library）のスクリーニング

体外毒性試験（体外毒理学）

• 微小核誘導の定量（Quantification of Micronucleus Induction）
• アポトーシス事象の検出（Detection of Apoptottic Events）

フォームフィルタリング（Phenotypic Screening）

• 骨髄前駆細胞分化を誘導する化合物のスクリーニング（Screening for Compounds that Induce Myeloid Progenitor Cell Differentiation）
• 多重細胞系のGFP発現スクリーニング（GFP Expression Screening in Multiple Cell Lines）
  

抗体開発
InliCytのスクリーニングシステムはMultiCytキットと結合し、複数の終点を同時に検出することができ、クローンライブラリの抗体の高スループットの鑑別と記述に役立つ。また、懸濁細胞を用いて分析する能力により、標的物質をそれらの自然構造下でスクリーニングすることができ、より良いハイブリドーマの情報を得ることができる。
ハイブリドーマスクリーニング
この混合後に検出された実験方法は、抗原の結合と交差反応特性を同時に評価することができる初期ふるいにおける既存の多くのステップを排除した。

標的細胞（非標識）と対照細胞（カルシトキサンチン標識）を混合し、微多孔質プレート中に分布させた。その後、ハイブリダイゼーション腫瘍ライブラリー中の測定抗体を加え、赤色蛍光を有する検出抗体とともにインキュベートした。次にiQueを用いて微多孔質プレートを分析し、同時にハイブリドーマ懸濁液中の抗体と標的細胞、対照細胞集団の結合を検出した。対照細胞との結合は交差反応性と非特異的結合性を示し、各ウェルの実験に内部対照を提供した。

未処理細胞の実験により、抗体スクリーニングを立体視エピトープ上で行うことができ、これはELISAおよび他の精製タンパク質実験ではできないことである。なぜなら、抗原は精製の過程でしばしば折り畳みを失って失活するからである。
系統間の交差反応性を決定する
InliCytスクリーニングシステムの多重機能は、抗体の異種系反応活性を研究開発のスクリーニングプロセスに組み込むことができる。MultiCyt Cell Encoder Kitキットにより、穴ごとに5つの細胞株を同時に検出することができる。

親細胞系と遺伝子工学的に改造されたマウス、ラット、マカク、ヒト受容体を発現する細胞系をそれぞれ標識し、1つのサンプルに混合した。ここで、未トランスフェクションの親細胞株を各サンプルの陰性結合対照とした。サンプルを96ウェル微多孔質プレートに添加して抗体結合実験を行い、次いで最初の篩検出抗体と2篩検出抗体を順次添加した。実験終了後、各サンプルの細胞系が確認され、個別に評価され、結合親和性曲線が生成された。この実験は4枚の96孔微孔板で行い、4種類の異なる実験条件下の12種類の抗体、8用量の曲線を得て、すべての実験は1時間以内に完成した。
抗体分泌細胞系の生産性を評価する
InliCytスクリーニングシステムの多重機能とMulti-Cyt IgG Count and Capture Kitキットを併用することで、生産性の高い細胞系の確認に成功する機会を高めることができる。

試料中に分泌された抗体は捕捉マイクロビーズに結合し、蛍光標識の検出試薬により検出された。不活性細胞を特異的に標識する染料を添加して、活性細胞と不活性細胞の比を決定した。ミクロ多孔質プレートを分析し、各サンプルは同時に3つの示度を記録した：分泌された抗体のレベル、総細胞数と不活性細胞のパーセント。これにより、細胞ごとに分泌される抗体レベルを容易に算出することができる。
ヒト生殖細胞のスクリーニングIgGライブラリ
InliCytスクリーニングシステムを用いてスクリーニング方法の開発を行うことができ、このスクリーニング方法は細胞表面発現抗原に適し、多重終点を検出することができる。これはHTFCスクリーニングシステムを用いて行われ、目標IgGが脂質細胞膜表面の天然環境でスクリーニングできるようにした。

細胞はGFPと標的抗原を用いて短時間共トランスフェクションを行い、その後、各グループは、3つの異なる標的抗原のうちの1つを発現し、一定量のカルシトキサンチンを細胞コード染料として標識した。トランスフェクションされた標識細胞は、個々のサンプルに物理的に混合され、ミクロ多孔質プレート上に分注され、これらのサンプルに対するIgGライブラリのスクリーニングが行われた。GFPの信号は、細胞が抗原を発現しているかどうかを確認するために使用され、細胞コード染料は、3つの細胞が同時に実験を行うことができ、それぞれの標的物を確認し、分析することができる。GFP陰性細胞は、標的抗原を発現しない内部陰性対照として作用する。細胞に結合したIgGを蛍光で二次検出し、染色したグループごとに評価した。
体外毒性試験
IntlliCytのスクリーニングシステムは、溶液中の何千もの細胞の健康性能を1秒間で分析することができ、MultiCytキットを用いた全自動の簡略化されたワークフローは、薬物開発に初期の遺伝子毒性に関するスクリーニング経路を提供する。
微小核誘導の定量
384微多孔板結合自動分析の場合、16時間かかっていた実験は現在30分で完了し、微核誘導実験がスクリーニングレベルの高スループットに達することができるようになった。
アポトーシスイベントの検出
InliCytのシステム、ソフトウェア、およびアプリケーションキットは、多重アポトーシス終点を識別し、特徴的に記述するために最適化され、確認される。同時にまたは異なる組み合わせでCaspase 3、Annexin V、ミトコンドリア脱分極、細胞活性、細胞数などの指標を監視して、各終点間のより良い相関性とより完全なアポトーシスプロセス図を得る。

フォームフィルタ
骨髄前駆細胞の分化を誘導する化合物のスクリーニング
InliCytスクリーニングシステムは、元骨髄前駆細胞の分化停滞を克服する生物関連化合物をスクリーニングし、細胞毒性を示す化合物を除去しながら幹細胞の分化を刺激する化合物を容易に決定することができる。

細胞系は遺伝子改変マウスに由来し、このマウスはプロモーターの制御下でGFPを発現する：分化した細胞はGFP（GFP+）を発現し、分化していない細胞はGFP（GFP-）を発現しない。35,000個の化合物による細胞活性、細胞数、および緑色蛍光を同時にスクリーニングした。各ウェルの前方散乱、横方向散乱、細胞数を測定することにより、活性染料なしで毒性化合物を決定し、同時にGFP+を決定することができる。ミクロ多孔質プレート熱マップ（Plate heat maps）は、分化を誘導する化合物（GFP陽性の細胞で表される）（GFP+plate）、細胞毒性（細胞の損失で表される）と多重パラメータを含む比（スクリーニング基準を設定するために作成される）を同時に研究することができる。
たじゅうさいぼうけいの緑色蛍光蛋白質表現フィルタ
多くの既知のGFPモデルと互換性があり、InliCytのスクリーニングシステムは懸濁細胞と壁貼り細胞上で高フラックス群の表現型分析を行うことができる。一時的にトランスフェクションされた細胞群中のGFP発現細胞を特定し、定量することができる。



微多孔質プレートの各サンプルについて、多重データは、データ評価のためにより生物学的に関連する情報を生成することができる。Lipofectamine（LF 2 K）トランスフェクション試薬によるHepG 2細胞の3倍（triplicate）実験。