U-Blot®PVDF印字膜（0.2μm）

U-Blot® PVDF印字膜（0.2μm）ポリフッ化ビニリデン（PVDF）微多孔質膜であり、各種ゲルマトリックスから蛋白質を転移させるために用いられる。硝酸セルロース膜と比較して、より優れた操作性を有している。

この疎水性膜には、0.45μmと0.2μmの2種類の孔径があり、さまざまな分子量範囲のタンパク質を結合できるようにしています。

• 0.45μm孔径：ほとんどのタンパク質に適用し、より高い検出感度を提供する。

• 0.2μm孔径：分子量が20000未満の蛋白質に適用し、小分子蛋白質のより良い吸着と保持を確保する。

U-Blot®PVDF印影膜は優れた蛋白質保持性、高い物理強度と広範な化学適合性を有し、免疫測定の選択になる。

U-Blot® PVDF印字膜（0.2μm）

1.SDS PAGEゲルを用いてタンパク質サンプルとタンパク質マーカーを分離する。

2.ゲルを慎重に切断し、放置し、ゲルを冷間移動緩衝液中で5〜20分間平衡させた。

3.フィルムとろ紙をゲルに適したサイズにカットします。PVDF膜を透明でない白色から均一な半透明灰色になるまで20秒間メタノール中で予湿し、その後超純水に1-2分間浸漬し、試薬の残留を除去した。その後、使用可能になるまで2〜3分間、冷間移動緩衝液中で平衡させた。

リマインダを使用するには：

膜が濡れたら、乾かさないでください。膜部分が乾く（不透明な白色になる）場合も、再湿潤しなければならない。

4.転写装置を順次組み立て、転写クリップスポンジマット濾紙の予湿した膜を裁断し、予湿したゲル濾紙スポンジマット転写クリップを転写し、置くたびにしわ、折り畳み、気泡の存在に注意しなければならない（接着板などの工具を利用して気泡を軽く押圧し、各層を密着させることができる）

5.使用する転写装置の説明に従って運転条件等を設定し、転写を開始する。

6.転写終了後、印影フィルムを取り出し、超純水中でゲル屑を短時間洗浄除去した。印影膜は、風乾貯蔵してもよく、免疫検査工程にすぐに使用してもよい。

タンパク質印影実験を成功させるためのいくつかの重要な要素、例えばタンパク質濃度、閉鎖液、抗体濃度は、以下のスキームで最適化する必要があるかもしれない。

標準免疫検査

1.プリントフィルムが乾いている場合は、メタノールに15秒間浸漬するか、色が透明でない白から半透明の灰色になるまで再湿潤してください。

2.超純水で印影膜を1分間洗浄する。

3.封止緩衝液に印影膜を入れ、軽く攪拌して1時間インキュベートした。

4.市販抗体希釈液、洗浄緩衝液または閉鎖緩衝液に抗希釈する。

5.希釈した抗溶液に印影膜を入れ、室温で1時間（または4°Cで一晩）インキュベートし、軽く攪拌した。

6.洗浄緩衝液（Tween含有®-20界面活性剤の緩衝液（TBSTまたはPBST））を5分間毎に3〜5回、印影膜を洗浄した。

7.市販抗体希釈液、洗浄緩衝液、または閉鎖緩衝液中に二次抵抗を希釈する。

8.希釈酵素標識二抗溶液に印字膜を入れ、室温で1時間インキュベートした。

9.洗浄緩衝液で印影膜を3〜5回、毎回5分間洗浄する。

10.プリントフィルムをきれいな容器に入れ、対応する検出試薬を加える。

11.検査用試薬説明書に従って1〜5分間インキュベートした。

（1）HRPまたはAP化学発光試薬に対して、印影膜をX線フィルムに曝露するか、イメージングシステムを用いてデジタル画像を取得する。

（2）発色検出に対して、試薬を添加し、信号が現れるのを待つ。