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酵素無検出キットの典型的な構成：

標準的なELISAキットには、通常、次のコンポーネントが含まれます。

1、事前にカプセル化された微孔板：96孔または48孔のプラスチックシートであり、孔内には事前に捕獲抗体または抗原がカプセル化されている（タイプに応じて）。これは反応が起こる場所です。

2、酵素標的二抗（または酵素標的検出抗体/抗原）：ELISAタイプに基づいて、ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ標識の二抗（間接法またはサンドイッチ法用）、または酵素標的抗原（競争法用）を提供する。

3、標準品：正確な濃度が知られている抗原（または抗体）シリーズ勾配溶液。標準曲線を描画し、サンプル中の測定対象物の濃度を計算するために使用します。

4、抗体を検出する（サンドイッチ法のみ）：標識されていない、抗原の別のエピトープに対する抗体。

5、サンプル希釈液：サンプルを希釈し、その基質を標準品と緩衝システムと整合させ、非特異性干渉を減少させるために使用する。

6、洗浄緩衝液：通常は吐温-20を含むリン酸塩緩衝液である。各ステップの間で結合していない物質を除去し、背景干渉を減らすために使用されます。洗濯が実験の成否の鍵かどうか！

7、閉鎖液：牛血清アルブミンまたは脱脂粉乳溶液を常用する。被覆後に微孔板上の結合していない部位を閉鎖し、次のステップでの非特異的な吸着を防止し、背景を低下させるために使用される。

8、基質溶液：

HRP：通常、テトラメチルビフェニルアミンまたは3、3'、5、5'-テトラメチルビフェニルアミン。

APの場合：一般的にp-ニトロベンゼンリン酸エステル。

9、終止液：

HRP-TMB：希硫酸溶液を常用する。

AP-pNPPの場合：常用*溶液。酵素反応を停止し、最終的な色を安定させるために使用されます。

10、板封膜：インキュベーション工程において微孔板を覆い、蒸発と汚染を防止する。

11、説明書：詳細な操作手順、試薬保存条件、注意事項、予想結果と標準曲線描画方法など。

サンプル処理と要求：

1.血清：血清分離管に収集した全血標本を室温で2時間或いは4℃で一晩放置し、その後1000×gで20分間遠心分離し、上清を採取すればよく、或いは上清を-20℃或いは-80℃に置いて保存するが、繰り返し凍結融解を避けるべきである。

2.血漿：EDTAまたはヘパリンを抗凝固剤として用いて標本を採取し、そして標本を採取後の30分間以内に2-8℃1000×gで15分間遠心分離し、上清を採取すれば検査でき、あるいは上清を-20℃または-80℃に置いて保存するが、繰り返し凍結融解を避けるべきである。

3.組織ホモジネート：予冷したPBS（0.01 M、pH＝7.4）で組織を洗浄し、残留血液（ホモジネート中で分解した赤血球は測定結果に影響する）を除去し、秤量後に組織を切断する。切断した組織と対応する体積のPBS（一般的に1：9の重量体積比、例えば1 gの組織サンプルは9 mLのPBSに対応し、具体的な体積は実験の必要に応じて適切に調整し、記録することができる。PBSにプロテアーゼ阻害剤を添加することを推奨）をガラスホモジナイザーに添加し、氷の上で十分に研磨する。組織細胞をさらに分解するために、均質スラリーを超音波破砕したり、凍結融解を繰り返したりすることができる。最後にホモジネート液を5000×gで5 ~ 10分間遠心分離し、上澄み検査を行った。

4.細胞培養物上清：1000×gを20分間遠心分離し、上清を採取すれば検査でき、或いは上清を-20℃或いは-80℃に置いて保存するが、繰り返し凍結融解を避けるべきである。

5.その他の生物標本：1000×gは20分間遠心分離し、上清を採取すれば検査できる。

6.サンプル外観：サンプルは澄みきって透明で、懸濁物は遠心分離して除去しなければならない。

7.サンプル保存：サンプル収集後、1週間以内に検査を行う場合は4℃に保存でき、適時に検査できない場合は、1回の使用量に分けて、-20℃（1ヶ月以内に検査）、または-80℃（6ヶ月以内に検査）に凍結保存し、繰り返し凍結融解を避け、サンプルの溶血は最後の検査結果に影響するため、溶血サンプルはこの検査を行うべきではない。

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