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ゼブラフィッシュドーパミン(DA)elisa検出キットの科学研究についての研究結果(Technology):テトラフィッシュドーパミン(DA)elisa検出キットの研究結果(Technology):テトラフィッシュドーパミン(DA)elisaの標準的な操作説明の概要を参照してください。具体的な手順は実際のキット説明書に準じてください。
一、実験前準備
-
試薬と材料
- キット(標準品、検出抗体、酵素標準板、基質A/B、終止液、洗浄液、封板膜などを含む)。
- サンプル(血清、血漿、組織均質スラリーなど)。
- 37℃恒温タンク、遠心分離機、ピペット、プレート洗浄機(または手動プレート洗浄機)、酵素スケール(450 nm波長)。
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サンプル処理
- 血清/血漿:遠心分離(3000×g、10分)し、清を採取する。
- 組織ホモジネート:ホモジネート後遠心分離(5000×g、10分)し、上澄みを取る。
- サンプルは繰り返し凍結融解を避け、4℃短期保存または-80℃長期保存する必要がある。
二、操作手順
1.標準品の調製
- 標準品の凍結乾燥粉を希釈液で再溶解し、説明書の勾配に従って希釈する。
2.サンプリング
- 穴ごとに100μLサンプルまたは標準品を入れ、空洞を設ける。
- 封板膜を被覆し、37℃で90分間インキュベートした。
3.洗濯
- 穴内の液体を捨て、穴ごとに350μLの洗浄液を加え、30秒間静置した後に捨て、3回繰り返した。残留液体を拍乾する。
4.抗体インキュベーションの測定
- 1ウェル当たり100μLのビオチン化抗体作動液を添加し、37℃で60分間インキュベートした。
- 3回洗浄する(シンクロフラッシュ3)。
5.発色反応
- 1ウェル当たり100μLの酵素結合物(HRP標識)を添加し、37℃で30分間光を避けてインキュベートした。
- 5回洗浄する(chedi洗浄液を除去する)。
6.停止反応と示度
- 1ウェル当たり50μL終止液を加え、45 nm波長で15分間酵素スケールを用いてOD値を測定した。
三、結果計算
- 標準曲線を描く
- 標準品濃度を横座標、OD値を縦座標とし、標準曲線(一般的なLogistic 4パラメータモデル)に適合する。
- サンプル濃度計算
- サンプルOD値に基づいて標準曲線式を代入し、LPA濃度を計算した。
四、注意事項
- 交差汚染を厳格に回避し、サンプリング時に銃頭を交換する。
- 洗浄工程はchediを必要とし、信号に影響を与えないようにする。
- 標準品と試薬は室温に戻してから使用する必要があります。
- 終止液は腐食性があり、操作には手袋を着用する必要がある。
- OD値が標準曲線の範囲を超えている場合は、サンプル希釈率を調整する必要があります。

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