ラットメラトニン（MT）ELISAキット

ラットメラトニン（MT）ELISAキット

アルファベットl（英語アルファベットの12番目のアルファベット）本キットはインビトロ定量検査用です血清、血漿、組織均質及び関連液体サンプル中ラットメラトニン（機械翻訳）の含有量を測定した。

アルファベットl（英語アルファベットの12番目のアルファベット）有効期間：6ヶ月

アルファベットl（英語アルファベットの12番目のアルファベット）保存条件：2-8℃

アルファベットl（英語アルファベットの12番目のアルファベット）本キットは科学研究用のみであり、臨床診断に使用してはならない

じっけんげんり

キットは二重抗体ワンステップサンドイッチ法による酵素結合免疫吸着試験（ELISA）を用いた。ラットメラトニン（MT）に捕捉された抗体を予めカプセル化したカプセル化微小孔に、標本、標準品、HRP標識の検出抗体を順に加え、インキュベートし、洗浄した。基質TMBを用いて発色させ、TMBはペルオキシダーゼの触媒下で青色に変換し、酸の作用下で最終的な黄色に変換する。色の濃淡はサンプル中のラットメラトニン（MT）と正の相関を示した。酵素スケールを用いて450 nm波長で吸光度（OD値）を測定し、サンプル濃度を計算した。

サンプル処理及び要求

1. 血清：血清分離管に収集した全血標本を室温で2時間または4℃で一晩放置し、その後1000×gで20分間遠心分離し、上清を採取すればよく、または上清を-20℃または-80℃に置いて保存するが、繰り返し凍結融解を避けるべきである。
2. 血漿：EDTAまたはヘパリンを抗凝固剤として用いて標本を採取し、そして標本を採取後の30分以内に2-8℃1000×gで15分間遠心分離し、上澄みを採取すれば検査でき、あるいは上澄みを-20℃または-80℃に置いて保存するが、繰り返し凍結融解を避けるべきである。
3.組織均質：予冷したPBS（0.01 M、pH＝7.4）で組織を洗浄し、残留血液（均質化中に分解した赤血球は測定結果に影響する）を除去し、秤量後に組織を切断した。切断した組織と対応する体積のPBS（一般的に1：9の重量体積比、例えば1 gの組織サンプルは9 mLのPBSに対応し、具体的な体積は実験の必要に応じて適切に調整し、記録することができる。PBSにプロテアーゼ阻害剤を添加することを推奨）をガラスホモジナイザーに添加し、氷の上で十分に研磨する。組織細胞をさらに分解するために、均質スラリーを超音波破砕したり、凍結融解を繰り返したりすることができる。その後、ホモジネート液を5000×gで5 ~ 10分間遠心分離し、上澄み検査を行った。

4.細胞培養物上清または他の生物標本：1000×gで20分間遠心分離して、清を取って検査することができて、あるいは上清を-20℃あるいは-80℃に置いて保存して、しかし繰り返し凍結融解を避けるべきです。

注：標本の溶血は後の検査結果に影響するため、溶血標本はこの検査を行うべきではない。

必要で提供されていない試薬や機材

• 酵素スケール（450 nm）

• 高精度サンプラ及びガンヘッド：0.5-10 uL、2-20 uL、20-200 uL、200-1000 uL

• 37℃恒温タンク

• 蒸留水又は脱イオン水

キット組成

ラットメラトニン（MT）ELISAキット備注：

1.標準品濃度は順に：80、40、20、10、5、2.5 pg/mL

2.大量の正常標本検査を経て、標本の正常濃度値はすべてキットが提供した検査範囲内であり、実験過程中に直接50μLサンプルをサンプリングすればよい。一部のサンプル値がzui大標準品濃度を超えている場合は、サンプル希釈液を用いてサンプルを適切に希釈してから実験を行う。

注意事項

• 正確な結果を保証するために、規定の時間と温度に厳格に従ってインキュベーションを行う。すべての試薬は使用前に室温20〜25℃に到達しなければならない。使用直後に試薬を冷蔵保存する。

• 洗濯板が正しくないと、不正確な結果になります。基質を添加する前に、できるだけ孔内の液体を吸引するようにしてください。温育中は微孔を乾燥させないでください。

• プレートの底に残っている液体や指の跡を取り除き、そうしないとOD値に影響します。

• 基質発色液は無色または薄い色を呈するべきで、すでに青くなった基質液は使用できない。

• 試薬と標本の交差汚染を回避し、誤った結果を招かないようにする。

• 貯蔵と温育の際に強い光が直接照射されることを避ける。

• 室温に平衡した後、密封バッグを開けて、水滴が冷たいスラットに凝集しないようにします。

• いかなる反応剤も漂白溶媒や漂白溶媒が放出する強いガスに接触してはならない。漂白成分はいずれもキット内の反応試薬の生物活性を破壊する。

• 期限切れの製品は使用できません。

• 病気を伝播する可能性がある場合は、すべてのサンプルを管理し、規定の手順に従ってサンプルと検査装置を処理しなければならない。

試薬準備

試薬カートリッジの冷蔵環境からの取り出しは室温平衡後に使用できるようにしてください。

20×洗浄緩衝液の希釈：蒸留水を1：20で希釈する、すなわち1部20×洗浄緩衝液に19部の蒸留水を加える。

操作手順

1. 室温20 min平衡後のアルミニウム箔袋から所望のスラットを取り出し、残りのスラットをセルフシール袋で密封して4℃に戻した。

2. 標準品孔とサンプル孔を設置し、標準品孔にそれぞれ異なる濃度の標準品50μLを添加する、

3. 試料孔に測定すべき試料50μLを添加し、空白の穴は入れない。

4. ブランクホールを除いて、標準品穴とサンプル穴に1穴ごとにワサビペルオキシダーゼ（HRP）標識の検出抗体100μLを添加し、封板膜を用いて反応穴を封止し、37℃水浴鍋または恒温箱で60 minインキュベートした。

5. 液体を捨てて、吸水紙の上でたたいて乾かして、穴ごとに洗浄液（350μL）をいっぱい入れて、1 min静置して、洗浄液を振り切って、吸水紙の上でたたいて乾かして、このように洗濯板を5回繰り返します（洗濯機で洗濯板を洗うこともできます）。

6. 各ウェルに基質A、Bをそれぞれ50μL添加し、37℃で15分間光を避けてインキュベートした。

7. 各ウェルに終止液50μL、15 minを加え、450 nm波長で各ウェルのOD値を測定した。

実験結果の計算

測定した標準品のOD値を横座標とし、標準品の濃度値を縦座標とし、座標紙上または関連ソフトウェアを用いて標準曲線を描き、直線回帰方程式を得て、サンプルのOD値を方程式に代入し、サンプルの濃度を算出した。

キット性能

• 測定範囲：2.5 pg/mL-80 pg/mL。

• 感度：低検出濃度は0.1 pg/mL未満であった。

• 特異性：他の可溶性構造類似体と交差反応しない。

• 繰り返し性：板内変異係数は10%未満、板間変異係数は15%未満である。

説明

現在の条件及び科学技術レベルはまだすべての供給業者が提供するすべての原料に対して全面的な鑑定と分析を行うことができないため、本製品には一定の品質技術リスクが存在する可能性がある。

• 最終的な実験結果は試薬の有効性、実験者の関連操作及びその時の実験環境と密接に関連しており、必ず十分な検体バックアップを用意してください。

• ロットによって同じ製品には若干の差がある可能性があります。例えば、検査制限、感度、発色時間など、キット内の説明書に基づいて実験操作を行ってください。サイトの電子版説明書は参考にしてください。

• 本キットのセット剤をすべて使用してこそ、検査効果が保証され、他の業者の製品を混用することはできません。*の検出結果は、本キットの実験的説明を厳守してこそ得られる。

• 当社はキット自体にのみ責任を負い、当該キットの使用によるサンプル消費には責任を負いませんので、使用者は使用前にサンプルの可能な使用量を十分に考慮し、十分なサンプルを予約してください。

• 化学分解液を用いて調製した組織ホモジナイズまたは細胞抽出液は、いくつかの化学物質の導入によりELISA実験結果にばらつきが生じる可能性がある。

• サンプルが細胞培養上清であれば、細胞状態、細胞数、サンプリング時間など、このようなサンプルの干渉要素が多いため、検出できない場合がある可能性がある。

• 原核及び真核組換えタンパク質を含むいくつかの天然タンパク質又は組換えタンパク質は、本製品に使用される検出抗体及び捕捉抗体と一致しないため、検出されない可能性がある。