ラット腎損傷分子1（Kim-1）ELISA検出キット

一、製品情報：

製品名：ラット腎損傷分子1（Kim-1）ELISA検出キット

製品ロット番号：詳細は製品ラベルを参照

有効期間：6ヶ月

保存条件：2-8℃

製品の用途：

本キットは、血清、血漿、組織ホモジネート及び関連液体サンプル中のラット腎損傷分子1（Kim−1）の含有量をinvitroで定量的に検出するために使用される。

二、検査原理：

キットは二重抗体ワンステップサンドイッチ法による酵素結合免疫吸着試験（ELISA）を用いた。ラット腎損傷分子1（Kim−1）に捕捉された抗体を予めカプセル化したカプセルに、標本、標準品、HRP標識の検出抗体を順に加え、インキュベートして徹底洗浄した。基質TMBを用いて発色し、TMBはペルオキシダーゼの触媒下で青色に変換し、酸の作用下で最終的な黄色に変換する。色の濃淡はサンプル中のラット腎損傷分子1（Kim−1）と正の相関を示した。酵素スケールを用いて450 nm波長で吸光度（OD値）を測定し、サンプル濃度を計算した。

以下はサンプル採取の一般的なガイドラインを示しているだけです。すべてのサンプル採取過程において、防腐剤としてアジドナトリウムを使用してはならない。

1.血清：熱原と内毒素を含まない試験管を使用し、操作中にいかなる細胞刺激を回避し、血清分離管に集めた全血標本を室温で2時間或いは4℃で一晩放置し、その後1000×gで20分間遠心分離し、上清を取ればよく、或いは上清を-20℃或いは-80℃で保存するが、繰り返し凍結融解を避けるべきである。

2.血漿：EDTAまたはヘパリンを抗凝固剤として用いて標本を採取し、そして標本を採取後の30分間以内に2-8℃1000×gで15分間遠心分離し、上清を採取すれば検査でき、あるいは上清を-20℃または-80℃に置いて保存するが、繰り返し凍結融解を避けるべきである。

3.細胞培養物上清またはその他の生物標本：1000×gを20分間遠心分離し、上清を採取すれば検査でき、または上清を-20℃または-80℃に置いて保存するが、繰り返し凍結融解を避けるべきである。

4.組織ホモジネート：予冷したPBS（0.01 M、pH＝7.4）で組織を洗浄し、残留血液（ホモジネート中で分解した赤血球は測定結果に影響する）を除去し、秤量後、グループ-織を切断する。切断した組織と対応する体積のPBS（一般的に1：9の重量体積比、例えば1 gの組織サンプルは9 mLのPBSに対応し、具体的な体積は実験の必要に応じて適切に調整し、記録することができる。PBSにプロテアーゼ阻害剤を添加することを推奨）をガラスホモジナイザーに添加し、氷の上で十分に研磨する。組織細胞をさらに分解するために、均質スラリーを超音波破砕したり、凍結融解を繰り返したりすることができる。最後にホモジネート液を5000×gで5 ~ 10分間遠心分離し、上澄み検査を行った。

注：標本の溶血は最後の検査結果に影響するため、溶血標本はこの検査を行うべきではない。

5.保存：サンプル収集後に適時に検査しない場合は、一回の使用量で分注して、-20℃に凍結保存して、繰り返しの凍結融解を避けて、室温で解凍して、サンプルが均一に凍結を充分解することを確保してください。

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ラット腎損傷分子1（Kim-1）ELISA検出キット