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www.shklsw.com
概要
ブタドーナツウイルス1型染料法蛍光定量PCRキットは、すぐに開けて使用し、ユーザーはウイルスサンプルを提供する必要があり、ブタドーナツウイルス1型染料法に基づいて配列設計された特定性プライマーを保存し、関連ウイルスと交差反応がなく、本製品は科学研究にのみ適用され、臨床診断には使用できない。
製品詳細
豚サーキュラーウイルス1型染料法蛍光定量PCRキット
豚サーキュラーウイルス1型（PCV-1）
製品と特徴：
豚円環ウイルス1型染料法蛍光定量PCRキット次の特徴があります。
1.ユーザーはウイルスサンプルを提供するだけで、すぐに使用できます。
2.豚円環ウイルス1型染料法に従って配列設計された特定のプライマーを保存し、関連ウイルスと交差反応しない。
3.感度は数百コピー/反応に達することができる。
4.1管式蛍光定量PCR検査を行い、後続汚染を避ける。
5.本キットは20μL反応系の蛍光定量PCRを50回で十分である。
6.本製品は科学研究にのみ適用され、臨床診断には使用できない。
| 番号 | 成分 | 仕様 |
| 試薬1 | 2×qPCR MagicMix |
|
| 試薬二 | 蛍光PCR専用テンプレート希釈液 | 1 mL（イエローキャップ） |
| 試薬3 | 豚サーキュラーウイルス1型染料法プライマー混合液 | 100μL（ホワイトカバー） |
| 試薬四 | 豚サーキュラーウイルス1型染料法ポリメラーゼ連鎖反応ポジティブペア 照（1×10E8拷贝/μL） | 50μL（レッドキャップ） |
| 試薬5 | デオキシリボ核酸ウイルス分解液（試用装置） | 15回（9 mL） |
| 使用マニュアル | 1部 |
： 低温輸送、-20℃保存、有効期間1年。
じこしやく： DNAテンプレート、10×ROX（機種別、具体的には使用方法を参照）。
使用方法 一、希釈PCR陽性対照（10 E 2-10 E 7コピー/μLの6つの10倍希釈度を例に）
1.注意：標準品の濃度が非常に高いため、以下の希釈操作は必ず独立した領域で行い、決してサンプルや本キットの他の成分を汚染してはならない）。製品の安定性を高め、拡散伝染性病原を回避するために、本製品は生体サンプルを陽性対照として提供せず、直接使用できるDNA断片のみを陽性対照として提供する。
3.コア付きガンヘッドに45μL蛍光PCR専用テンプレート希釈液をそれぞれ添加する（好ましくはコア付きガンヘッド、以下同じ）。
4.7番管に5μL 1×10 E 8コピー/μLの陽性対照を添加し、十分に1分間振動させ、1×10 E 7コピー/μLの陽性対照を得た。氷の上に置いて使う。
5.銃頭を交換し、6番管に5μL 1×10 E 7コピー/μLの陽性対照（前段階希釈で得られた）を加え、十分に1分間振動させ、1×10 E 6コピー/μLの陽性対照を得た。氷の上に置いて使う。
6.銃頭を交換し、5番管に5μL 1×10 E 6コピー/μLの陽性対照を5番管に加え、1分間十分に振動させ、1×10 E 5コピー/μLの陽性対照を得た。氷の上に置いて使う。
7.6つの希釈度の陽性対照が得られるまで、上記の操作を繰り返した。氷の上に置いて使う。
二、サンプルDNAの調製：
8.N個のサンプルがある場合、N+2個の抽出を設定しなければならない。多く出た1つはPC（サンプル調製陽性対照）であり、
1つは10μLアップステップで調製したPCR陽性対照の第4号（濃度は1×10 E 4コピー/μL、10μLは1万コピーに相当）または第5号（濃度は1×10 E 5コピー/μL、10μLは10万コピーに相当）に一定量の水を加えて全体積を毎回調製要求された体積と同じにしてPCとすることができる。またNCとして水を用いる。調製ごとに200μLサンプルが必要な場合、PCとNCの体積も200μLでなければならない。
9. サンプルのDNA，本キットは、市販のほとんどのウイルスDNA抽出キットと互換性があります。本キットは、チューブ型ウイルスDNAoutを15回無料でプレゼントします。
三、設定qPCR反応（20μL系、サンプル調製室で行う）：
10. やるだけなら1回繰り返すと、N+9個のPCR管が標識され、そのうちN+2個は前段階で得られたN+2個に用いられる
サンプル、1つはPCR陰性対照用、6つはPCR陽性対照用である。2〜3回繰り返すと、反応設定数はそれに応じて2または3倍増加する。
11. 標識管に以下の表に各成分を添加する（本表は1回の繰り返しのみを記載する。試料管と陰性対照の設置が終わってから陽性対照を設置し、陽性対照試料はすべての管に蓋をして保存してから最後に加える）：
| 成分 |
| PCR陰性対照管 | PCR陽性対照管理（2-7管） |
| 2×qPCR MagicMix（カラーチューブ） | 10μL | 10μL | 各10μL |
| 豚サーキュラーウイルス1型染料法PCRプライマー混合液（ホワイトキャップ）の使用方法について説明する。（2）：PCRプライマー混合液（ホワイトキャップ）。（2）：（2）：（2）：（2）：（2）（2）（2）（2） | 2μL | 2μL | 各2μL |
| 自己準備10×ROX（注参照） | 2μL | 2μL |
|
| N+2試料DNAテンプレート | 6μL | 追加しない | 追加しない |
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希釈液（2-7号） | 追加しない | 追加しない | 各6μL（2号見本から2号管、3号見本から3号管…） |
注：ABI 7500、7700、7900機器のみが対照としてROXを使用する必要があり、他の蛍光PCR機器（例えばiCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 およびLightCycler 480）ROXを使用する必要がない場合は、水で代用します。
12.蓋をしてから機械に乗り、次のパラメータでPCRを行う（具体的なPCRパラメータは機器によって自己最適化することができる）。
| プロセス | 温度 | 時間 |
| よへんせい | 92℃ | 5分 |
|
PCR反応 （30サイクル） | 94℃ | 60秒 |
| 50℃ | 60秒 | |
| 72℃ | 60秒 |
13.データ収集
具体的な操作は使用する機器の推奨フローに従って行う。DNAの場合、最大吸収スペクトルは471 nmであり、DNAを結合した場合の最大吸収スペクトルは500 nmであり、最大発光スペクトルは530 nmである。信号収集は複素化または伸長ステップに設定することができる。
四、データ処理：
14.本キットを定量検査に用いる場合は、陽性対照濃度のlog値を横軸とし、Ct値を縦軸として標準曲線を描画する。測定するサンプルのCt値を用いて標準曲線からサンプルDNA濃度のlog値を推定し、その濃度を推定した。
15.本キットを定性検査に用い、陽性または陰性のみを判断する場合、陰性対照Ctは40以上でなければならない。陽性対照には蛍光対数成長が必要であり、典型的な増幅曲線があり、Ct値は30以下でなければならない。測定サンプルでは、Ctが40以上であれば陰性、35以下であれば陽性であった。35～40の間であれば、1回繰り返します。反復実験のCt値は40以上であれば陰性、40未満であれば陽性であった。
仅供科研使用，不得用于临床检验及治疗使用。
