臓器培養キット（肝癌、結腸癌、腎癌）

使用方法

1、元の世代
（1）取材後の組織は予冷した（2−8°C）組織保存液Eのサンプリングボトルに入れ、速やかにクリーンラボに移送して組織処理と細胞分離を行い、写真を撮り、情報を登録しなければならない。
（2）いくつかのシャーレを用意し、4℃で予冷した初代培養緩衝液Bを加えて予備とする。
（3）サンプリングボトルを消毒し、組織をシャーレに入れ、初代培養緩衝液Bで3回洗浄した後、眼科ジアンまたは手術daoを用いて組織ジアンを体積約1-3 mmに切断する3の組織ブロックです。
（4）組織はヒト乳癌初代組織でye C消化を消化し、37℃で10-20 min振動消化し、（消化過程で随時消化情況を観察する）。
（5）少量の液体を採取して顕微鏡下で観察し、鏡下で比較的に多い単一細胞または70 um以下の細胞クラスタを観察した後、三倍体積初代培養緩衝液Bを添加して消化を停止する。
（6）100 um孔径のスクリーンを用いて濾過し、濾液を収集した後、300 gで5分間濃縮した後、上清を除去し、初代培養緩衝液Bを添加して遠心分離を再懸濁する。
（7）マトリックス接着剤計算：第6工程後に収集した組織体積を観察し、組織体積の25倍のマトリックス接着剤を添加する（アブス9495）再懸架敷板。
（8）24ウェル細胞培養プレートを例に、1ウェル当たり25 ul組織マトリックスゲル混合物を敷板（4℃で操作）した。
（9）敷いた培養プレートを37℃培養箱に10-15 minゲル化し、ヒト乳癌系器官培地A（室温回復）を添加して培養した。
2、類器官継代培養
（1）ピペットガンは培地を吸引除去し、穴ごとに1〜2 mlの4℃系器官継代培養緩衝液Gを添加して2分間放置する。
（2）ピペットガンは基質ゲルを軽く吹き付け、15 mlの遠心管に集め、4℃で10分間静置した。（6～8穴ごとにグループ）
（3）a：類器官の数が不足または体積が比較的小さい：遠心5 minで上清を捨て、適量の類器官継代培養緩衝液Gを添加して1.5 mlの遠心管に再懸濁し、300 gの遠心5 minで液体を捨てて第4ステップを行う。
b：類器官の数が多い或いは体積が大きい場合：遠心5 minは上清を捨て、適量類器官継代消化液Dを添加して2-3 minを消化し、類器官継代培養緩衝液Gを添加して消化を中止し、遠心5 minは混合液を捨て、適量類器官継代培養緩衝液Gを添加して1.5 ml遠心管に再懸濁し、300 g遠心5 minは液体を捨てて第4歩を行う。
（4）類器官収集後、基質ゲルを添加して再懸濁し、各ウェル25 ul基質ゲルを24ウェル細胞培養板に敷き、培養箱に10-15 min放置して500 ulヒト乳癌類器官培地Aを添加する。
3、類器官の凍結保存
（1）ピペットガンは培地を吸引除去し、穴ごとに1〜2 mlの4℃系器官継代培養緩衝液Gを添加して2分間放置する。
（2）ピペットガンは基質ゲルを軽く吹き付け、15 mlの遠心管に集め、4℃で10分間静置した。（6～8穴ごとにグループ）
（3）遠心5 minで上清を捨て、適量の類器官継代培養緩衝液Gを添加して再度再懸濁し、300 gで遠心5 minで液体を捨てる。
（4）適量類器官凍結保存液Fを添加し、軽く吹きつけて重懸濁し、24孔細胞培養板を例とする：密度は2孔凍結保存1管、1管体積1.4 ml。
（5）標識情報を作成し、プログラムの冷却を行った後、液体窒素に移して長期保存する。
4、類器官の回復
（1）10 ml類器官継代培養緩衝液Gを15 ml遠心管に採取した。
（2）液体窒素タンクから凍結保存された臓器細胞を取り出し、37℃の水浴鍋に急速に入れて溶解する。
（3）水浴の融解過程において、凍結保存液が1〜2 min以内に融解することを確保するために、凍結管を軽く揺動する必要がある。
（4）溶解後の類器官細胞を15 ml遠心管に迅速に移し、ピペットを用いて6〜8回軽く吹き、300 gを5分間遠心し、その後上清を除去し、類器官細胞沈殿を収集する。適量の器官継代培養緩衝液Gを添加して1.5 ml遠心管300 gに5分間遠心分離した。
（5）基質ゲルを再懸濁し、1ウェル当たり25 ul基質ゲルを24ウェル細胞培養板に敷き、培養箱に10-15 minゲル化し、500 ulヒト乳癌類器官培地Aを添加した。