マウスミリスチン酸ELISA検出キット

マウスミリスチン酸ELISA検出キット

取扱説明書

検出原理

キットは二重抗体一段階サンドイッチ法による酵素結合免疫吸着試験（ELISA）前もって包む被肉豆蔻酸（ミリスチン酸）HRP標識の検出抗体をインキュベートし、洗浄した。基質TMBを用いて発色し、TMBはペルオキシダーゼの触媒下で青色に変換し、酸の作用下で最終的な黄色に変換する。色の濃淡とサンプル中の肉豆蔻酸（ミリスチン酸）提示正相関。酵素スケールで450 nm波長で吸光度（OD値）を測定し、サンプル濃度を計算した。

サンプル収集、処理及び保存方法

1.血清：熱源と内毒素を含まない試験管を使用し、操作中にいかなる細胞刺激を回避し、血液を収集した後、3000回転遠心10分で血清と赤血球を迅速に注意深く分離した。

2.血漿：EDTA、クエン酸塩またはヘパリン抗凝固。

3.細胞上清：3000回転遠心10分間で粒子とポリマーを除去する。

4.組織均質：組織を適量の生理食塩水に加えて砕く。3000回転遠心10分で上清を取る。

5.保存：サンプル収集後に適時に検査しない場合は、一回の使用量で分注して、-20℃に凍結保存して、繰り返しの凍結融解を避けて、室温で解凍して、サンプルが均一に凍結を充分解することを確保してください。

持参品

1. 酵素スケール（450ナノメートル）

2. 高精度サンプラ及びガンヘッド：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温タンク

操作上の考慮事項

1. キット保存先2〜8℃、前室温平衡を用いて20分間。

2. 実験中に使われなかったスラットはすぐに自己封袋に戻し、密封（低温乾燥）して保存しなければならない。

3. 濃度は0のS 0号標準品は陰性対照または空白と見なす、説明書に従って操作すると、サンプルは5倍希釈され、最終的な結果に5を乗じてサンプルの実際の濃度になります。

4. 説明書に記載された時間、液添加量及び手順に従って温育操作を厳格に行う。

5. すべての液体成分を使用する前に十分に均一に振る。

キット組成

注：標準品（S 0−S 5）濃度順次次のようになります。0、50、100、200、400、800 pg/mL

試薬の準備

20×洗浄緩衝液の希釈：蒸留水を1：20で希釈する、すなわち1部の20×洗浄緩衝液に19部の蒸留水を加える。

プレート洗浄方法

1. 手動洗濯板：穴内の液体を振り切り、穴ごとに洗浄液を満タンにし、静置する

2. 自動洗濯機：穴ごとに洗浄液を注入する350μL，1 min浸し、プレートを5回洗います。

操作手順

1. 室温平衡から20 min後のアルミニウム箔袋から必要なスラットを取り出し、残りのスラットをセルフシール袋で密封して4℃に戻した。

2. 標準品穴とサンプル穴を設置し、標準品穴にそれぞれ異なる濃度の標準品を加える50μL

3. サンプル穴にテストサンプルを追加する10μL，空白の穴は入れない。

4. ブランクホールを除いて、標準品穴とサンプル穴にそれぞれの穴にワサビペルオキシダーゼ（HRP）標識された検出抗体100μL、反応孔を封板膜で封止し、37℃水浴釜または恒温箱で60 minインキュベートした。

5. 液体を捨て、吸水紙をたたいて乾かし、穴ごとに洗浄液を満タンにし、静置する1min，洗濯液を振り切って、吸水紙をたたいて乾かし、このように洗濯板を5回繰り返します（洗濯機で洗濯板を洗うこともできます）。

6. 穴ごとに基質を入れるA、B各50μL、37℃で15分間光を避けてインキュベートした。

7. 穴ごとに終止液を入れる50μL、15 min内で、450 nm波長で各ウェルのOD値を測定した。

標準カーブの描画ひょうじゅんかーぶのびょうが:Excelワークシートでは、標準品濃度を横座標とし、OD値に対応して縦座標とし、標準品線形回帰曲線を描き、曲線方程式に基づいて各サンプル濃度値を計算する。
マウスミリスチン酸ELISA検出キット