米国GeneCopoeia(複合遺伝子)は、共通データベースをカバーする*ゲノムmiRNA作用に基づく標的発現クローンを提供する。miRNA標的発現クローンは、SV 40プロモーターによって駆動されるレポーター遺伝子(ホタルフルオレセイン)の下流の3’−UTR(すなわち、miRNA作用部位)配列を含む。2番目のレポーター遺伝子renilla luciferaseは、トランスフェクション、発現効率を監視し、内参することができる。
ヒトゲノムmiRNA標的発現クローンの特徴
ホタルフルオレセインの活性分析により、潜在的標的遺伝子に対するmiRNAの制御作用の結果を得ることができる。クローン転写を発現して蛍蛍蛍光体酵素ORFと3’UTRのキメラmRNAを形成し、特異的なmiRNAがあれば3’−UTRのある配列と相補的に結合することができ、キメラ中の蛍光体酵素ORFがコードするタンパク質の活性もそれに応じて制御されるため、蛍光体酵素の発光強度を検出することによってmiRNA対応標的のmRNA制御の効果を定量的に測定することができる。
miRNA前駆体と標的発現クローンの応用
- 遺伝子発現制御:トランスフェクションまたはウイルス粒子感染の方式により単一またはセットのmiRNAを培養細胞に導入し、単一のmiRNAまたは複数のmiRNAによる遺伝子発現制御を行う。miRNAの制御効果と機能に対して特定の条件または体系化の研究を行う
- miRNA標的遺伝子の確認と鑑定:miRNA標的を用いて発現クローンを検証し、大規模なmiRNA作用標的遺伝子のスクリーニングと実証を行う。1つのmiRNAが作用可能なすべての標的の遺伝子と、1つのmRNAに作用可能な3’−UTRすべてのmiRNA