M-1マウス腎集合管細胞（SV 40形質転換）／STR同定

M-1マウス腎集合管細胞（SV 40形質転換）／STR同定

細胞紹介

細胞はtg（SV 40 E）Bri 7トランスジェニックマウスの正常腎組織に由来し、SV 40ウイルスのDNA配列を含み、形態やCCD（皮質結合管）抗原などの皮質集合管の特定の特性を保持している。M−1細胞の多くのクローンは、皮質集合管中の閏細胞または主細胞の特徴を有している、5〜10%の細胞には、うるう細胞と主細胞の二重表現型がある。

さいぼうとくせい

1）出所：マウス腎

2）形態：上皮細胞様、壁貼り成長

3）含有量：>1 x 106細胞数

4）規格：T 25本または1 mL凍結保存管包装

5）用途：科学研究用のみ。

輸送と保存

ドライアイス輸送及び蘇生生存細胞

（1）1 mL凍結保存管包装ドライアイス輸送、受け取った後-80度冷蔵庫で一晩保存した後、液体窒素に転入するか、直接回復し、もしドライアイスが揮発してきれいになり、凍結保存管のキャップが脱落し、破損し、細胞に汚染があることを発見したら、すぐに私たちに連絡してください。

（2）T 25瓶で回復した生存細胞を常温出荷し、受け取った後、細胞受信後の処理方法に従って操作する。

細胞受容後の処理

1）細胞を受け取った後、75%アルコール消毒瓶壁はT 25瓶を37℃培養箱に置いて約2-3 h放置し、培養瓶の破損、液の溢れ及び細胞の汚染が発見された場合、写真を撮った後、直ちに連絡してください。

2）4または5 X顕微鏡下で細胞状態を確認し、同時に受け取ったばかりの細胞の写真（10×、20×）各2-3枚と培養瓶の外観写真1枚を保存して、アフターサービス時に受け取った時の細胞状態の根拠としてください。

3）壁貼り細胞：細胞は37℃培養箱に2-3 h放置し、顕微鏡下で細胞の成長と壁貼り状況を観察し、壁貼り細胞の中には宅配輸送中に振動により脱落と脱落後に塊になるものもある。鏡下観察細胞の成長密度が60%以下であれば、培養瓶中の灌液培地を除去し（壁に貼られていない細胞があれば遠心回収し、元培養瓶に再懸濁して打ち込む）、新たに調製した完quan培地6-8 mLを加え、細胞培養箱に入れて培養を続けることができる。細胞成長密度が70〜80%以上に達すると、細胞を継代処理することができる。継代過程で輸送振動により脱落した細胞は遠心回収が必要である。

4）備考：輸送用の培地（灌液培地）は細胞の培養には使用できません。説明書の細胞培養条件に従って新たに調製した完quan培地と交換して細胞を培養してください。細胞を受け取った後の継代はT 25培養瓶1：2継代を提案した。

M-1マウス腎集合管細胞（SV 40形質転換）／STR同定

一.培地及び培養凍結保存条件の準備

1）DMEM/F-12（推奨iCell-0005）培地添加の準備：0.005 mMデキサメタソン、2対抵抗、1%。

2）培養条件：気相：空気、95%、二酸化炭素、5%。温度：37℃、培養箱の湿度は70%〜80%である。

3）凍結保存液：90%血清、10%DMSO、現用現用配合。

二.細胞処理：

1）凍結保存細胞の回復：

1 mLの細胞懸濁液を含む凍結貯蔵管を37℃の水浴中で急速に揺動解凍し、4-6 mLの完quan培地を含む遠心管に加えて均一に混合した。1000 RPM条件下で3〜5 min遠心分離し、上清を捨て、完全なquan培地再懸濁細胞を得た。次いで、細胞懸濁液を6〜8 mlの完quan培地を含むフラスコ（または皿）に加え、37℃で一晩培養した。翌日の顕微鏡下で細胞成長状況と細胞密度を観察した。

2）細胞継代：細胞密度が80〜90%に達すると、継代培養を行うことができる。

壁貼り細胞の継代には以下の方法を参考にすることができる

1.培養上清を廃棄し、カルシウム、マグネシウムイオンを含まないPBSで細胞を1〜2回潤洗した。

2.0.25%（w/v）トリプシンmei-0.53 mM EDTAを培養瓶に添加し（T 25瓶1-2 mL、T 75瓶2-3 mL）、37℃培養箱に入れて細胞層が分散するまで消化し（通常5〜15分以内）、培地が正常pH値（7.0〜7.6）に達するようにし、顕微鏡下で細胞消化状況を観察し、塊を避けるために、細胞分離を待つ間、フラスコを叩いたり揺らしたりして細胞を攪拌したりしないでください。分離が困難な細胞は、分散を容易にするために37°Cに配置することができる。細胞の大部分が丸くなり、脱落したら、速やかに操作台に戻し、培養瓶を数回軽くたたいた後、10%FBSを含む培地3-4 mlを加えて消化を停止した。

3.軽く均等にしてから吸引し、1000 RPM条件下で3-5 min遠心分離し、上清を捨て、1-2 mLの培養液を補充してから均等に吹き付ける。細胞懸濁液を1：2の割合で新しいT 25瓶に分け、説明書の要求に従って配置された新しいwan全培地を6-8 ml添加して細胞の成長活力を維持し、後続の継代は実際の状況に基づいて1：2 ~ 1：5の割合で行った。

3）細胞凍結保存：細胞を受け取った後、前3世代の培養時に細胞種子を凍結保存し、後続の実験に備えることを提案する。

次のT 25本を例に挙げます。

1.細胞凍結保存時に細胞継代の過程に従って消化した細胞を遠心管に収集し、血球計数板を用いて計数し、細胞の凍結保存密度を決定することができる。一般細胞の推奨凍結保存密度は1×10 ^ 6 ~ 1×107個の生細胞/mlであった。

2.1000 rpmで3〜5 min遠心分離し、上清を除去する。調製した細胞凍結貯留液を用いて細胞を再懸濁し、1 mlの凍結貯留液当たり1×10 ^ 6 ~ 1×107個の生細胞/mlを1つの凍結貯留管に分配し、細胞を凍結貯留管に分配し、名称、代数、日付などの情報を表示した。

3.凍結保存する細胞をプログラム冷却ボックスに入れ、−80度の冷蔵庫で一晩放置した後、液体窒素容器に移して保存した。同時に液体窒素容器内の凍結貯蔵管の位置を記録して、後続の調査と使用のために。