ヒト食道上皮細胞HET 1 A（STR）

一、ヒト食道上皮細胞HET 1 A（STR）培養条件

二、受入後処理

蘇生細胞処理方法：良好な状態に培養した後、培養液を充填し、瓶の口を密封することは細胞を輸送する最善の方法である。細胞を受け取ってアルコール75%で全体にスプレーします細胞瓶、きびしい無菌後細胞状態を安定化するために、細胞ビンを培養箱に2〜4時間静置した静置後顕微鏡で細胞の成長状況を観察し、そして細胞に対して異なる倍数の写真保存（好ましくは40 x、100 x、200 x各1枚）を行い、前の3日間の写真は重要なアフターフォロー根拠であり、写真を提供せずにデフォルトの受信状態は良好である。

凍結保存細胞の処理方法：細胞を受け取った後、発泡箱の中にドライアイスが残っているかどうか、凍結保存管が完全で破損していないかどうかを観察し、もしドライアイスが気化したり、凍結保存管が解凍破損したりしていることが発見されたら、直ちに写真を撮って私たちに連絡してください。細胞の署名から3日以内に連絡がない場合は、デフォルトでは正常に出荷されています。回復の第1管に活性な問題があれば、すぐに連絡してください。技術者はあなたと相談して指導してから第2管を回復してください。当方に連絡せずに勝手に回復した第二管に問題が発生してもアフターサービスをしない。

細胞培養工程

一細胞継代:80%の合流度を超えない場合、瓶詰めの培養液を遠心管に集め、5 mlの培地を残し、37℃、5%COを入れる₂インキュベーションタンク細胞密度が80%を超えると、継代培養を行うことができる。

壁細胞手順は次のとおりです。

1）培養上清を廃棄し、カルシウム、マグネシウムイオンを含まないPBSで細胞を1〜2回潤洗する、

2）1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53 mM EDTA）を培養瓶に加え、培養箱に入れて1 min消化し、その後顕微鏡下で細胞消化状況を観察し、細胞の大部分が丸くなり脱落した場合、速やかに操作台に戻し、培養瓶を数回軽くたたいた後、6 mlの10%血清含有の培地消化を止める

3）細胞を軽く吹き付け、脱落後遠心管に吸引し、1000 rpmで5-8 min遠心分離し、上澄み液を捨て、1-2 mL培地を補充した後、均等に吹き付ける。

4）細胞懸濁液を5−6 mL毎に培地を補充し、新たに5−6 mLの培地を含む6 cm皿またはT 25培養瓶に1：2の割合で分けた。

（すなわち、1つのT 25瓶を2つのT 25瓶または2つの6 cmの培養皿に継代接種する）

懸濁細胞次のように継承されます。

1、半液交換法

半交換液処理、縦培養瓶を培養箱に1時間程度静置し、3 ml程度の培地を軽く吸引し、その後3 mlの培地を補給し、培地の変色が遅い場合は、直接500 ul程度のFBSを加えることができ、継代の際は直接5 ml培地を補給して2つの培養瓶に分けて培養することができ、一般的には継代3回程度で遠心継代し、死細胞を取り除くことができる。

2、遠心交換法

フラスコが必要ならば、細胞懸濁液を遠心管中の1000 rpm、5 min遠心分離し、上清を捨て、1-2 mL培養液を補充した後、再懸濁混和した後、細胞懸濁液を1:2の割合で新T 25フラスコに分け、6-8 mlを明細書の要求に従って配置した新しい培地を添加して細胞の成長活力を維持し、後続継代は実際の状況に基づいて1:2 ~ 1:5の割合で行う。

b細胞凍結保存：

1、細胞が培養瓶の80%面積を覆うまで成長した場合、T 25培養瓶の培養液を捨て、PBSで細胞を1回洗浄する。

2、0.25%消化液約1 mlを培養瓶に添加し、逆さま顕微鏡下で観察し、細胞が収縮して丸くなったら5 ml培養液を加えて消化を中止し、細胞を軽く吹き付けて脱落させ、その後懸濁液を15 ml遠心管に移し、1000 rpm遠心5 min ;

3、上清を捨て、沈殿細胞を1 mlのヤジ生物無血清凍結貯留液（品番：C 7001）に添加し、混合した後に凍結貯留管に添加した。

4、凍結保存細胞を直接-80℃の冷蔵庫に入れればよく、後期に細胞を液体窒素タンクに転入する場合、-80℃の冷蔵庫が必要中24時間以上保管液体窒素タンクに再転入する。

C細胞回復：

1、液体窒素から細胞凍結貯蔵管を取り出す（保護の着用に注意するマスク)、すばやく配置 37℃の水浴中で解凍し、凍結保存管中に結晶がなくなるまで解凍し、次いで75%のアルコールで凍結保存管外壁を拭き、

2、凍結保存管中の細胞を含有量に移動する 5 ml培地の15 ml遠心管中、1000 rpm遠心5 min ;

3、上清を捨て、沈殿して5 ml培地で再懸濁し、接種するT 25培養瓶に入れて37℃、5%CO₂細胞培養箱で培養する、

4、翌日、新鮮な培地に変えて培養を続けた。

注意事項：一部の細胞は壁に張り付いていないので、輸送中に細胞が脱落しやすいのが正常な現象です。もし離脱が多い場合、培養瓶のすべての培養液を遠心管に収集することができ、1000 rpmは5分間遠心し、上澄みを集める過渡培養をする.（後期比較培養）、沈殿物を1−2 ml加え、軽く吹き付け、再懸濁し、1−2分間消化した後、5 ml培地を加えて反応を停止した。さらに遠心分離し、清を捨て、培地1〜2 mlを加えて再懸濁した。次にフラスコ継代（2つのT 25）を1：2の割合で行い、新しい培地を5-8 ml/瓶に補充し、最後に入れた37℃、5%コバルト₂細胞培養箱で培養する。

新旧のお客様からの問い合わせを歓迎します。ヒト食道上皮細胞HET 1 A（STR）