Fluo−8 AM，Cell Permeantカルシウムイオン蛍光プローブ

Fluo−8 AM，Cell Permeantカルシウムイオン蛍光プローブ

製品紹介

Fluo-8（Fluo-2 Medium Affinity），現在最も明るい可視光励起波長Ca 2＋蛍光プローブであり、その蛍光強度はFluo−4より2倍強く、Fluo−3より4倍強い。Fluo-8は中程度のCa 2+親和性を持ち、ほぼ近いFluo-3，Fluo-4（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM、Fluo-4: Kd= 0.389μM），使用上はFluo-3とFluo-4とほぼ同じです。Fluo-8ローダーは温度依存性が弱く、室温または37℃でのインキュベーションはすべて染色が良好で、Fluo-3とは異なり、Fluo-4は37℃でインキュベーションすることを厳格に要求しており、この特徴はHTS高フラックススクリーニング実験により適している。Fluo−8の応用は広く、多くの細胞系や標的試料と互換性があり、リガンドや標的自体の信号に干渉されない。

Fluo−8は、レーザー共焦点顕微鏡、フローサイトメトリー、蛍光酵素スケール、蛍光顕微鏡などにより細胞内カルシウムイオンレベルの変化を検出することができる。Fluo-8、AMはFluo-8のアセチルメチル誘導体で、細胞膜透過性があり、簡単に培養するだけで、簡単に細胞に入ることができる。一旦細胞内に入ると、そのラクターゼによって膜透過性のないFluo−8がせん断されて生成され、それによって細胞内に滞留して対応する生理機能を発揮する。

本品は50 ugの小包装の凍結乾燥粉末の形で、細胞内のCa 2+レベルの測定に用いた場合、推奨濃度は1-5 uMである。

Fluo−8 AM，Cell Permeantカルシウムイオン蛍光プローブ

きほんとくせい

どうぎめい：Fluo-8，AM

分子式C50H50N2お23

分子量：1046.9316

ようかいせい：DMSO（1-5 mM）に溶解

Ex/Em：490/514 nm（Ca 2＋結合）、

ちょぞうじょうけん：-20℃に置いて乾燥保存し、1年間有効期間。

Fluo−8 AM，Cell Permeantカルシウムイオン蛍光プローブ

使用方法

A試薬準備

1）Pluronic F-127母液を調製する：100 mg Pluronic F-127粉末（品番：Cat No.FS 0432）に500 ul DMSOを加え、20%（W/V）母液を調製する。溶解過程は40〜50℃で20〜30 min加熱する必要がある。溶液は室温で保存し、冷蔵する必要はない。結晶析出があれば、再加熱溶解でき、使用に影響しない。

2）HHBS BUFFER(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer,pH7.3)

B操作手順

1）無水DMSOを用いてFluo−8を溶解し、AMを1−5 mMの貯蔵液に調製し、または調合されたFluo−8、AM貯蔵液を室温で戻した。（例：4 MMの母液に調製する場合、50 ugFluo-8、AMに11.9 ulの無水DMSOを添加する必要がある）。

2）HHBSまたはその他の生理緩衝液Fluo-8、AM+DMSO貯蔵液で1-10 uMの作動液に希釈し、事前に適量の20%Pluronic F-127溶液を添加し、最終濃度を0.02%にした。

【注（1）】：Fluo-8、ほとんどの細胞におけるAM応用の推奨装填濃度は4-5 uMであり、具体的な使用濃度は実験要求に応じて最適化する必要がある。過負荷による細胞毒性を回避するためには、結果を得た上でできるだけzui低プローブ濃度を使用することをお勧めします。

【注（2）】：Fluo-8、AM作動液は繰り返し凍結しないように現在配合して使用する必要がある。

【注（3）】：Pluronic F-127はFluo-8を防止し、AMは溶液中で重合し、細胞へのプローブの侵入を促進することができる。しかし、Pluronic F-127はFluo-8、AMの安定性を低下させることができるため、作動液を調製する際に加えることだけを提案し、貯蔵液を加えて長期保存することは提案しない。

【注（1）】：プロピルスルホンスまたはスルピドン貯留液はかなりアルカリ性であるため、培地添加後にpHを再調整する必要がある。

4）準備したFluo-8、AM作動液を細胞に添加し、細胞を覆う量で添加した。37℃または室温で20〜60 minインキュベートした。

【注（1）】：インキュベーションの時間について、首ciが実験をして確定できない場合、まず30 minインキュベーションし、蛍光効果を見ることを提案する、細胞死が多い場合は、適切に時間を短縮する。蛍光強度が弱すぎる場合は、適切に時間を延長します。

【注（2）】：プローブ装填温度を下げるとプローブの区画化現象が低下する可能性がある。

6）レーザー共焦点、フローサイトメトリー、蛍光酵素スケールなどの適切な器具を用いて、波長Ex/Em=490/520 nmで検査を行う。

【注（1）】：Fluo-8、AMが細胞内に入った後、エステラーゼ分解によりFluo-8が形成され、細胞質内に供給結合の形で滞留しているわけではない。そのため、染料を添加した生細胞を固定処理し、Ca 2+レベルで検出することはできない。

注意事項

1）蛍光染料が均一に消光している問題では、蛍光消光を遅らせるためにできるだけ遮光に注意してください。

2）アセトキシメチル（AM）は湿気を吸いやすいので、冷蔵庫から取り出した後、乾燥した環境で室温に置いてから開封してください。試薬は微量なので、開封前に粉末が管底に落ちないように短い遠心分離をしてください。

3）Fluo-8、AMは4℃、氷浴などの比較的低い温度で凝固して遠心管底、または管壁または管蓋内に付着し、20-25℃で全溶解までしばらくインキュベートした後に使用することができる。

4）Fluo-8、AMは初めて使用し、貯蔵液は現在配合して使用することを提案し、単回使用量に分けて、厳格に≦-20℃密封乾燥凍結保存を行い、湿気を防止する。良好な実験効果を保証するために、できるだけ短時間で使用する。

5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。