E 14細胞専用培地

鄒無菌操作鄒：細胞培養は無菌環境下で行う必要があり、使用前に超清浄作業台に紫外線照射滅菌を行い、培養箱を定期的に洗浄する必要がある。実験者は作業服、靴カバーを交換し、マスク、手袋を着用する必要がある。

鄒器材滅菌鄒：ガラス容器、金属器具などは高圧蒸気滅菌を採用することができ、プラスチック製品はエチレンオキシドを選択して滅菌するか、滅菌した製品を購入することが多い。

‌試薬選択‌：使用する培養液、血清、緩衝液などの試薬は無菌、汚染がなく、使用前に無菌検査を行う必要がある。異なる細胞は培養液成分に対して異なる要求があり、細胞タイプに応じて適切な培養液を選択しなければならない。

‌培養条件‌：多くの哺乳類細胞の適切な培養温度は37℃であり、偏差は±0.5℃に制御すべきである。培養箱は良好な密封性を維持し、定期的にガス濃度と流量を検査し、細胞培養は通常5%CO 2を必要として培養液のpH値の安定を維持する。培養箱内の湿度は95%前後に維持しなければならない。

‌日常観察：細胞形態、成長状態、培養液の色変化を毎日顕微鏡下で観察した。

‌定期的な検出‌：定期的に細胞に対してマイコプラズマ、細菌、真菌などの汚染検査を行った。

E14細胞専用培地

製品紹介

E14細胞培地はチームは入念に最適化し、長期的なテストを経て、本製品は維持することができるE 14細胞の優れた成長状態。

この製品にはすでに含まれています E 14細胞の成長に必要な各種成分は、いかなる成分も添加する必要はなく、E 14細胞の培養に直接使用することができる。

製品の主要成分

DMEMベース培地405 mL

特級胎児牛血清 75ミリリットル

輸送と保存

輸送：バイオ氷嚢を含む保温箱に入れて低温輸送

保存方法：2℃〜8℃、光を避け、2ヶ月保存する、׏

注意科学研究用に限る。

培養システムの一部の成分は人体の健康に有害な物質であり、暴露された皮膚で培養システムの液体と培養システムの液体が残っている容器の内部に接触しないでください。この部分の有害物質は濃度も危害性も低く、接触があればすぐに水道水で洗い流せばよい。

回復

1）恒温水浴釜の水を37℃に予熱する、

2）15 mlの遠心管を用意し、5 mlの10%FBS含有培地を加え、37℃の水浴鍋に入れて予熱する、

3）ゴーグル、厚い毛糸手袋を着用した後、液体窒素タンクから回復する細胞を取り出し、できるだけ早く37℃恒温水浴釜に移す

復温管を揺動させて復温速度を高める、

4）融解した凍結保存管中の細胞を事前に準備した遠心管中に吸い込み、混合した後、1000 rpmで5分間遠心し、

5）T-25培養瓶を用意し、細胞名、日付を記入し、さらに4 ml培地を加える、

6）遠心分離完了後、上清を捨て、培地1 mlで細胞を再懸濁した後、T-25細胞培養に移し、混合して転入する

CO 2培養箱中培養静置。

継代（細胞継代推奨一伝二）

1）細胞合流度が85%以上に達した場合、継代を行うことができる。

2）生物安全キャビネット内で、培養瓶の瓶口を開け、瓶内の培地を収集する、

3）培養瓶に無菌3 mlの1×PBSを添加した後、培養瓶を水平に置き、PBSが培養瓶の底面上のすべての面積に浸潤でき、PBSを吸引廃棄できるようにする、

4）瓶に消化液1 mlを添加し、底面を浸潤した後、37℃CO 2培養箱に入れて1 ~ 2分間インキュベートする、

5）インキュベーション完了後、倒置顕微鏡下で細胞が丸くなって浮遊しているかどうかを観察し、すべて消化されれば培養瓶に10%FBSを含む2 mlの培地を直接添加し、懸濁液を15 ml遠心管に吸い込む、

①無菌の15 ml遠心管を用意し、10%FBS含有培地2 mlを添加する。

②消化した細胞を①の遠心管内に吸い込む（吹き付けを避ける③）、前に消化した培養瓶に1 mlを加えて2 min程度消化を続け、培養瓶を軽くたたいて、95%程度の細胞が脱落した。

6）1000 rpm遠心分離5 min、

7）2つの新しいT−25培養瓶を用意し、それぞれ4 ml培地を加えた。

8）遠心分離完了後、上清を捨て、2 ml培地で遠心細胞を再懸濁し、再懸濁後の細胞を2つのT-25培養瓶に移し、各培養瓶に1 mlずつ;

9）培養瓶を水平に置き、振動混合した後、培養瓶を37℃、5%CO 2培養箱中に静置培養した。

凍結保存（細胞凍結保存推奨T 25 1本に1本）

1)~ 6）参照継代手順

7）遠心分離完了後、上清を捨て、1 mL凍結貯留液で細胞を再懸濁して沈殿させ、その後1.8 ml凍結貯留管に移した、

8）凍結保存管をイソプロパノールを充填したプログラム冷却ボックスに移し、その後-80℃の冷蔵庫に移して一晩冷却する。

9）翌日、冷却が完了したシーケンシャル冷却ボックスの凍結貯蔵管を取り出し、できるだけ早く液体窒素タンクに移して保存する。

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IL1R2組換えラットIL1R2/IL1RB/CD121bタンパク質（彼のラベル）蛋白質

GRP94（gp96 0.5mgGRP94）94kDaサッカリン(抗原)

ANP32Aリストラ人ANP32A/pap1タンパク質（His&GSTラベル）蛋白質

ヒトBLOC 1 S 2蛋白質リストラ人BLOC1S2/BLOS2タンパク質（GSTラベル)

PGLYRP 1蛋白マウス組換えマウスPGLYRP1/PGRP-Sタンパク質（彼のM

E14細胞専用培地GRP94（gp96 0.5mgGRP94）94kDaサッカリン(抗原)

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