ネコカップウイルス検出キット

ネコカップウイルス検出キット包装規格】25 T/ケース&50 T/ケース

【検証原理】

ネコカップウイルス検出キット本キットはこの遺伝子に対して特異的プライマーと分子ビーコンプローブを設計し、検査対象サンプルにこのDNAが含まれている場合、PCR反応が進行し、蛍光信号を放出することができる。計器を用いてPCR過程中の対応する蛍光信号に対してリアルタイムモニタリングと出力を行い、検査結果の定性分析を実現する。

【主な構成成分】

【貯蔵条件及び有効期間】遮光-20℃以下で保存し、繰り返し凍結融解を避け、有効期間は12ヶ月である。

【適用機器】ABIシリーズ、Bio-Radシリーズ、Agilent Stratagene MXシリーズ、Roche LightCycler R 480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Geneシリーズ、杭州博日シリーズなどの多チャンネルリアルタイム蛍光定量PCR計。

【サンプル要件】

1.原始標本を用いて検査を行う場合。標本（患者の脳脊髄液、静脈血、関節液、病畜静脈血、乳汁、コロニー、キノコなど）は新鮮に採取し、双蒸滅菌水または滅菌生理食塩水を用いて懸濁した原始標本でなければならない。

2.増菌後にPCR検査を行う必要がある場合、選択的増菌液を用いて原始標本に増菌を行うべきである。

3.標本収集後すぐに検査できなければ、2〜8℃で一晩冷蔵保存することができ、長期保存が必要な場合、標本は-20℃〜-80℃に凍結保存しなければならない。

【検査方法】

（1）冷蔵庫からキットを取り出し、キットから実験に必要な試薬を取り出し、十分に溶融混和して瞬時に遠心して管壁付着液を除去する。

（2）本実験に必要な反応数（n）を計算し、次の表に示す反応系に基づいて本実験に必要な各種試薬量を計算する。

n＝陰性対照数（1 T）＋陽性対照数（1 T）＋誤差予備量（1 T）＋サンプル数

（3）無菌遠心管に上記試薬を加え、十分に混合した後、瞬時に遠心する。試薬を20μL/チューブ分注量でPCR反応チューブに分注した。

（4）PCR反応管の蓋を閉めた後、PCR反応管をサンプル処理区に移す。残りの試薬は-20℃以下の冷蔵庫に戻して冷凍保存した。

DNA/RNA抽出キットを用いて核酸を抽出すればよく、具体的な操作はそのキットの説明書に従って操作する。

3.サンプリング

上記で調製したPCR反応サンプル管に処理した測定対象サンプルDNA各5μl、最終体積25μl/管をそれぞれ添加し、PCR反応蓋を蓋して混和した後、瞬時に低速遠心分離し、PCR機器に移した。陰性対照と陽性対照はそれぞれ5μLキット持参の陰性対照または陽性対照品を加え、最終体積は25μl/管であり、PCR反応カバーをしっかりと閉じて混合した後、瞬時に低速遠心分離し、PCR機器に移した。

4.PCR（PCR増幅領域）

（1）サンプル処理エリアに用意されたPCR反応管を採取し、リアルタイム蛍光定量PCR計サンプル槽の相応の位置に置き、そして配置順序を記録する。

（2）下表に計器核酸増幅関連パラメータを設置してPCR増幅を行う。

【参考値（参考範囲）】

1.キット有効性判定：

（1）陽性対照：典型的なS型増幅曲線またはCt値≦35がある。

（2）陰性対照：Ct値＞38またはCt値なし、線形は直線または軽微斜線、指数成長期なし。

2.標本結果判定：

（1）陽性：標本検査結果Ct値≦35または明らかな指数成長期があった。

（2）疑わしい：標本検出結果Ct値は35〜38の範囲内である。この時、標本に対して繰り返し検査を行い、もし繰り返し実験結果Ct値が35〜38の範囲内で、明らかな指数成長期があれば、陽性と判定し、そうでなければ陰性と判定する。

（3）陰性：検体検査結果Ct値＞38またはCt値なし。

【検査結果の解釈】

【検査方法の限界】

1.検出サンプル中の被検核酸濃度が本キットの検出より低い場合に偽陰性が発生する可能性がある結果。

2.被検試料の採取、輸送、貯蔵及び処理過程における操作方法が適切でないとDNA分解を起こしやすく、偽陰性結果を生じる。

3.サンプルは採取、輸送、貯蔵及び処理中に交差汚染が発生すると、偽陽性結果が得られやすい。

【製品性能指標】製品の検出限界は103 Copies/mL、製品CV値は≦3%である。

【注意事項】

1.本キットを使用する実験室は、国家の関連部分が公布した遺伝子増幅検査実験室の管理規範に厳格に従って管理しなければならない。

2.RNA分解を回避するために、サンプル処理プロセスは0〜4℃の条件下で操作し、実験が終わったらすぐに機械に乗って検査する。サンプル処理過程で使用する器具消耗品はヌクレアーゼフリー処理を経なければならない。

3.各区域の物品はすべて専用で、汚染を避けるために交差して使用してはならない、検査が終わったら、直ちにテーブルを清潔にしなければならない。

4.反応液を吸引する時、できるだけ気泡の発生を避けるべきである、PCR器にかける前に、液体の蒸発による結果が不正確にならないように、各反応管の蓋がしっかりしているかどうかを注意して検査しなければならない。

5.キットのすべての試薬は使用前に常温で十分に溶融混合し、瞬時に遠心分離しなければならない。

6.キット内に配合された陰性及び陽性対照は、最初の使用前にすべて標本準備区域に移し、単独で保管しなければならない。

7.蛍光干渉を防止するために、素手でPCR反応管に直接接触することを避け、そしてPCR反応管にいかなる標識を行うことを避けるべきである、

8.検査過程で使用した吸引ヘッドは、直接10%次亜塩素酸を入れた廃棄物シリンダー内に打ち込み、検査が終わったPCR反応管は、蓋を開けてはならず、他の廃棄物と一緒に滅菌して廃棄しなければならない。

機器増幅関連パラメータは本明細書の関連要求に従って設定しなければならない。異なるロット番号の試薬は混用できない、有効期間内に使用します。製品は科学研究にしか使われていない。