ブタバクテリア（Br.Suis）核酸検出キット

【製品名】ブタバクテリア（スイス）核酸検出キット

【包装規格】50 T/ケース

【製品方法】じつじかんけいこうPCR法

ブタバクテリア（スイス）核酸検出キット【主な構成成分】

RT−PCR反応液、混合酵素液、陽性対照、陰性対照。

【貯蔵条件及び有効期間】

光をさける-20℃以下で保存し、繰り返し凍結融解を避け、有効期間は12ヶ月である。

【適用機器】
ABIシリーズ、Bio-Radシリーズ、Agilent Stratagene MXシリーズ、Roche LightCycler R 480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Geneシリーズ、杭州博日シリーズなどの多チャンネルリアルタイム蛍光定量PCR計。

【検査方法】

試薬準備（試薬準備ゾーン）

（1）冷蔵庫からキットを取り出し、キットから実験に必要な試薬を取り出し、十分に溶解混合して瞬時に遠心分離して管壁付着液を除去する。

（2）本実験に必要な反応数（n）を計算し、次の表に示す反応系に基づいて本実験に必要な各種試薬量を計算する。

n＝陰性対照数（1 T）＋陽性対照数（1 T）＋誤差予備量（1 T）＋サンプル数

（3）無菌遠心管に上記試薬を添加し、十分に混合した後、瞬時に遠心する。試薬を20μL/チューブ分注量でPCR反応チューブに分注した。

（4）PCR反応管の蓋を閉めた後、PCR反応管をサンプル処理区に移す。残りの試薬は-20℃以下の冷蔵庫に戻して冷凍保存した。

2.サンプル準備（サンプル処理エリア）

用いるQIAGEN、Roche社DNA抽出quキットはquDNAを抽出し、具体的な操作はそのキット説明書に従って操作する。

3.サンプリング

上記で調製したPCR反応試料管にはそれぞれ処理された検体DNA各5μl、最終体積25μl/管を添加し、PCR反応蓋を蓋して混和した後、瞬時に低速遠心分離し、PCR機器に移した。陰性対照と陽性対照はそれぞれ5μLキット持参の陰性対照または陽性対照品を加え、最終体積は25μl/管であり、PCR反応カバーをしっかりと閉じて混合した後、瞬時に低速遠心分離し、PCR機器に移した。

PCR（PCR増幅領域）

（1）サンプル処理エリアに用意されたPCR反応管を採取し、リアルタイム蛍光定量PCR計のサンプル槽の対応する位置に置き、そして配置順序を記録する。

（2）下表に計器核酸増幅関連パラメータを設置してPCR増幅を行った。

注：ABIシリーズ蛍光PCR計は設置時にROX補正を選択せず、クエンチ基を設置してNoneを選択する。

【参考値（参考範囲）】

1.キット有効性判定：

（1）陽性対照：典型的なS型増幅曲線或いはCt値≦35がある。

（2）陰性対照：Ct値＞38またはCt値なし、線形は直線または軽微斜線、指数成長期なし。

2.標本結果判定：

（1）陽性：標本検査結果Ct値≦35または明らかな指数成長期があった。

（2）疑わしい：標本検出結果Ct値は35〜38の範囲内である。この時、標本に対して繰り返し検査を行い、もし繰り返し実験結果Ct値が35〜38の範囲内で、明らかな指数成長期があれば、陽性と判定し、そうでなければ陰性と判定する。

（3）陰性：標本検査結果Ct値＞38またはCt値なし。

【検査方法の限界】

検出サンプル中の被検核酸濃度の含有量が本キットの最も低い場合di検出限界dhiは偽陰性の結果が生じる可能性がある。

本キットは標本の予備スクリーニングのみに使用され、本キットの検査陽性結果に対してさらに培養法を用いて確定診断を行うべきである。

【注意事項】

本キットを使用する実験室は、国家の関連部分が公布した遺伝子増幅検査実験室の管理規範に厳格に従って管理しなければならない。

回避のためRNA分解、サンプル処理過程は0-4℃の条件下で操作し、そして実験が終わったらすぐに機械に乗って検査する。サンプル処理過程で使用する器具消耗品はヌクレアーゼフリー処理を経なければならない。

各地域の物品はすべて専用であり、汚染を避けるために交差して使用してはならない。検査が終わったら、直ちにテーブルを清潔にしなければならない。

反応液を吸引する時、できるだけ気泡の発生を避けるべきである、上PCR器の前に、液体の蒸発による結果が不正確にならないように、各反応管がしっかりと蓋をしているかどうかを注意して検査しなければならない。

キットのすべての試薬は使用前に常温で十分に溶融混合し、瞬時に遠心分離しなければならない。

キット内に配合された陰性及び陽性対照は、初回使用前にすべて標本準備エリアに移し、単独で保管しなければならない。

蛍光干渉を防止するためには、裸手で直接接触しないことPCR反応管、そしてPCR反応管にいかなる標識を行うことを避けるべきである、

検査中に使用した吸引ヘッドは、直接に盛有に打ち込むべきである10%次亜塩素酸の廃棄物シリンダー内で、検査が終わったPCR反応管は、蓋を開けて、他の廃棄物と一緒に滅菌して捨てないでください。作業台及び各種実験用品は定期的に10%次亜塩素酸、75%アルコール或いは紫外線ランプで消毒しなければならない。

9.機器増幅関連パラメータは本明細書の関連要求に従って設定しなければならない、異なるロット番号の試薬は混用できない、有効期間内に使用します。