AKR（マウス食道癌細胞）

AKR（マウス食道癌細胞）

二、細胞受容後の処理

1）細胞を受け取った後、75%アルコール消毒瓶壁はT 25瓶を室温に置いて約1時間放置し、培養瓶の破損、液の溢れ及び細胞の汚染が発見された場合、写真を撮った後、直ちに連絡してください。

2）4または5 X顕微鏡下で細胞状態を確認し、同時に受け取ったばかりの細胞の写真（10×、20×）各2-3枚と培養瓶の外観写真1枚を保存して、アフターサービス時に受け取った時の細胞状態の根拠としてください。

3）壁貼り細胞：細胞は室温で1 h放置し、顕微鏡下で細胞の成長と壁貼りを観察し、一部の壁貼り細胞は宅配輸送中に振動により脱落し、脱落して塊になることがある。鏡下観察細胞の成長密度が60%以下であれば、培養瓶中の灌液培地を除去し（壁に貼られていない細胞があれば遠心回収し、元培養瓶に再懸濁して打ち込む）、新たに調製した遊び全培地6-8 mLを加え、細胞培養箱に入れて培養を続けることができる。細胞成長密度が70〜80%以上に達すると、細胞を継代処理することができる。継代過程で輸送振動により脱落した細胞は遠心回収が必要である。

4）細胞輸送途中の脱落操作方法：脱落した細胞を遠心分離した後に上清を捨て、PBSで一通り洗浄し、遠心分離して上清を捨て、遠心管に1 mlのアレ酵素を加えて20秒程度吹き散らし消化し、全培地を加えて消化を停止した後、遠心再舗装し、残りの壁貼り細胞は正常壁貼り細胞継代方法に従って操作する。

5）備考：輸送用の培地（灌液培地）は細胞の培養には使用できません。説明書の細胞培養条件に従って新たに調製したプレーフル培地と交換して細胞を培養してください。細胞を受け取った後、最初の継代提案T 25培養瓶1：2継代。

三、細胞培養操作

1）蘇生細胞：以下の細胞培養凍結保存処理は参考に供し、具体的な操作手順は商品取扱説明書を主とする

細胞懸濁液1 mLを含む凍結保存管を37℃の水浴中で急速に揺動解凍し、培地4 mLを加えて均一に混合した。1000 rpm条件下で3分間遠心分離し、上澄み液を捨て、培地を1〜2 mL加えた後、均等に吹き付けた。その後、すべての細胞懸濁液を適量の培地を含むフラスコに加えて一晩培養する（または細胞懸濁液を6 cm皿に加え、約4 mLのプレーフル培地を加え、一晩培養する）。3日目に液を交換し、細胞密度を検査した。

2）細胞継代：細胞密度が80〜90%に達すると、継代培養を行うことができる。

a）培養上清を廃棄し、カルシウム、マグネシウムイオンを含まないPBSで細胞を1〜2回潤洗する。

b）消化液1 mL（0.25%Trypsin-0.02�TA）を培養瓶に加え、消化液をすべての細胞に浸潤させ、培養瓶を37℃培養箱に入れて1-3 min消化し（細胞消化の状況に応じて）、顕微鏡下で細胞消化状況を観察し、細胞の大部分が丸くなって脱落した場合、速やかに操作台に戻し、培養瓶を数回軽くたたいた後、2-3 ml遊んで全培地を加えて消化を終了する。

d）細胞懸濁液を新しい8 mL培地を含む新しい皿または瓶に1：2の割合で分け、培養箱に入れて培養した。

壁細胞継代の注意点：

l必ずPBSで洗わなければならない。

l細胞は何度も観察して時間を把握し、細胞が基本的に脱落しないうちに消化を中止して吹き落とさないようにして、細胞が分化しやすくなり、死亡しやすいようにしてください。

l細胞に吹きかけっぱなしにしない

3）細胞凍結保存：細胞成長状態が良好な場合、細胞凍結保存を行うことができる。次のT 25本を例に挙げます。

a）細胞及び細胞培養液を収集し、無菌遠心管に入れ、1000 rpm条件下で4分間遠心し、上澄み液を捨て、PBSで一回洗浄し、PBSを捨て、細胞計数を行った。

c）凍結貯蔵管を−80℃の冷蔵庫に入れ、24時間後に液体窒素灌漑に移して貯蔵する。次回取り出すために、チューブの凍結位置を記録します。

四、育成注意事項

1）細胞に問題が発生し、再発する場合

a）細胞輸送途中に遭遇した各種問題、細胞損失、瓶体破損、培養液の深刻な液漏れなど、再発；

b)細胞汚染問題は、製品を受け取ってから3日以内に、真実な実験結果を提出して、確認してから再発してください。

c）常温出荷した細胞を2時間静置した後、ドライアイス凍結保存して出荷した細胞が回復してから2日後、ほとんどの細胞は生存していない、（真実で明瞭な細胞状態写真を提供する必要がある）、再送、

d）ドライアイス凍結保存出荷した細胞が回復した2日後または常温出荷した細胞は2時間静置し、未開封で汚染、再発が発生した、

e）細胞活性の問題は、製品を受け取ってから7日以内に私たちに真実な実験結果を提出してください、台望藍染色法で細胞の活力を鑑定して、毎日の細胞写真と確認してから再送してください、

f）細胞が受け取った当日及び2、3日目に写真を撮ってください。3日以内に知らなかった場合、製品合格と見なす。4-7日以内に問題が発生した場合、細胞を受け取る3日前の写真と細胞に問題が発生した写真及び細胞に関する操作の詳細なステップを提供し、技術者とコミュニケーションする必要がある場合、技術者が当方の責任と判断した場合、再送する。

2）細胞に問題があり、再発しない場合

a）顧客操作による細胞汚染、再発しない、

b）顧客の深刻な操作ミスにより細胞状態が悪く、再発しない、

c）細胞培養系による細胞状態が悪く、再発しないことを推薦しない、

d）細胞状態が悪く、真実で明瞭な培養前3日間の細胞状態写真を提供せず、再発しない、

e）細胞培養時に他の処理を経て細胞に問題が発生した場合、再発しない、

f）細胞を受け取り、問題を発見し、顧客サービス員とコミュニケーションする時間が7日以上であることを証明した場合、再発しない、

g）具体的な状況に応じて決定する。

五、注意事項

1.すべての動物細胞は潜在的な生物危害性があると見なし、二級生物安全台内で操作しなければならない。そして、保護に注意して、すべての廃液とこの細胞に接触した容器は滅菌してから捨てることができる必要がある。

2.凍結保存細胞を回復する際には、保護手袋、衣類、保護マスクを着用することを推奨します。注意：凍結貯蔵管が液体窒素に浸漬すると漏れ、徐々に液体窒素が充満する。解凍時、液体窒素が気相に転化すると、容器が爆発したり、危険力で蓋を吹き飛ばしたりする可能性があり、舞い上がった屑が発生して人的被害を与える可能性がある。

3.この細胞は科学研究用にのみ使用されている！説明書は参考にして実際の入荷説明書を基準にしてください！