組換えヒト神経成長因子−β（β−NGF）

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神経成長因子（しんけいせいちょうけいすう）交感神経と感覚ニューロン系の発育と維持に重要である。しんけいせいちょうけいすうα、β、γサブユニットという3種類のポリペプチドからなる複合体であることが確認された。ただし、βサブユニット、すなわちβ-NGFは、26.9キロダルトンを含む蛋白質 241 個の残基があり、ニューロンの生存と分化に関与する。さらに、β-NGFやはりTRKA受容体のリガンド、TRKA受容体は痛覚と温覚ニューロンの分化と発育所である。

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1.細胞培地とEdU溶液を500：1の割合で混合し、2×EdU標識培地を作製した。

2.2×EdU標識培地を事前に予熱した後、150マイクロリットルの2×EdU標識培地を等体積細胞培地と混合し、1×EdU溶液を得た。

【注】：①細胞増殖の速度に影響を与える可能性があるように、全培地を置換することは推奨されていない。②配置された培地は、細胞を通過していないことが適切な量で現在使用されることを提案した。

3.細胞を2時間インキュベートし、培地を廃棄した。

【注】：①培養時間は細胞の増殖速度と成長状態に依存する。

4.細胞を1 xPBSで2回、毎回5分間洗浄して、DNAが組み込まれていないEdU残留を除去した。

【注】：壁に密着していない細胞に対して洗浄強度を低下させることができる。

実験手順：

1.細胞を104〜105個の細胞／ウェルの密度で96ウェルプレートに播種し、100μL培地を加え、測定すべき化合物を含むか含まない。細胞をCO 2培養箱中で37℃で24時間培養した。

2.プレートに10μLの異なる濃度の測定対象物質を添加する。

3.培養槽内で培養プレートを適切な時間（例えば6、12、24、または48時間）培養する。

4.プレートの各ウェルに10μLのCCK-8溶液を添加した。気泡を穴に入れないように注意してください。

6.プレートを読む前に、レール発振器に軽く混ぜます。

7.酵素スケールを用いて450 nmにおける吸光度を測定する。

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