組換えヒト骨形態発生蛋白3（BMP-3）

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BMP-3骨生成素とも呼ばれ、成人の骨に含まれる量が高いBMPああ、少なくとも15種類の構造と機能に関するビットマップに属するへんかんせいちょうけいすうβ超家族メンバー。へんかんせいちょうけいすうβファミリーメンバーは細胞増殖、分化、マトリックス合成、アポトーシスの鍵となる調節因子である。その名前の通り、骨形成蛋白骨と軟骨の発育、成長、再形成を開始、促進、調節することができる。それ以外にも、骨形成蛋白他の多くの組織や臓器の産前発育、産後成長、再構築、維持にも参加している。BMP-3成人骨格に多く存在し、次は胎児軟骨である。BMP-3シグナルカスケードを活性化することによって、アンタゴニストは骨細胞産生素のシグナル伝達を促進し、それによって骨形成と骨形成を抑制する。

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1.細胞培地とEdU溶液を500：1の割合で混合し、2×EdU標識培地を作製した。

2.2×EdU標識培地を事前に予熱した後、150マイクロリットルの2×EdU標識培地を等体積細胞培地と混合し、1×EdU溶液を得た。

【注】：①細胞増殖の速度に影響を与える可能性があるように、全培地を置換することは推奨されていない。②配置された培地は、細胞を通過していないことが適切な量で現在使用されることを提案した。

3.細胞を2時間インキュベートし、培地を廃棄した。

【注】：①培養時間は細胞の増殖速度と成長状態に依存する。②ほとんどの腫瘍細胞及び接着細胞系は2時間のインキュベーション時間を用いることができる。

4.細胞を1 xPBSで2回、毎回5分間洗浄して、DNAが組み込まれていないEdU残留を除去した。

【注】：壁に密着していない細胞に対して洗浄強度を低下させることができる。

実験手順：

1.細胞を104〜105個の細胞／ウェルの密度で96ウェルプレートに播種し、100μL培地を加え、測定すべき化合物を含むか含まない。細胞をCO 2培養箱中で37℃で24時間培養した。

2.プレートに10μLの異なる濃度の測定対象物質を添加する。

3.培養槽内で培養プレートを適切な時間（例えば6、12、24、または48時間）培養する。

4.プレートの各ウェルに10μLのCCK-8溶液を添加した。気泡を穴に入れないように注意してください。

5.プレートを培養箱で1〜4時間インキュベートした。

6.プレートを読む前に、レール発振器に軽く混ぜます。

7.酵素スケールを用いて450 nmにおける吸光度を測定する。

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