えきそうカラム

えきそうカラム

液体クロマトグラフィー装置のシステムは、アキュムレータ、ポンプ、注入器、カラム、検出器、記録計などのいくつかの部分から構成されている。リザーバ中の移動相は高圧ポンプでシステムに打ち込まれ、試料溶液はサンプラを経て移動相に入り、移動相によってカラム（固定相）内にロードされる。試料溶液中の各成分は2相中で異なる分配係数を持つため、2相中で相対運動をする時、複数回の吸着・脱着の分配過程を経て、各成分は移動速度に大きな差を生じ、単一成分に分離されてカラム内から順次流出し、検出器を通過する時、試料濃度は電気信号に変換されて記録計に転送され、データはスペクトル形式で印刷される。

げんりこうぞう

［1］液体クロマトグラフィーカラムの構造：

a 、空柱は柱継手、柱管及びフィルターから組み立てられる

柱継手は低デッドボリューム構造を採用し、柱継手は両端ねじアセンブリで、一端は7/16インチの雌ねじで、他端は3/16インチの雌ねじ（国内外で規範化されている）である。7/16インチ雌ねじは1/4インチ柱管（Φ6.35 mm）に接続され、中間にシール用の圧環が配置されている。3/16インチの雌ねじは1/16インチ（Φ1.57 mm）の接続管に接続され、中央にも圧環が柱継手のシールに使用されている。カラム外のデッドボリュームをできるだけ減らすために、カラムを取り付ける際には、Φ1.57 mmの接続チューブで中空ネジリングを通過した後、できるだけ底まで差し込んでから中空ネジを締めます。圧環が中空ねじで押圧する変形された後、連結管に締め付けられる（連結管が圧環を通過する後に露出する管長は厳密に2に制御すべきである.5 mmの長さまたはその他の固定寸法）。

両端のカラム継手内には、カラムフィラーが移動相によってカラム外に飛び出して流失しないように封止するために、カラム管の両端にステンレスフィルタ（またはフィルタ）が1枚ずつ配置されている。空柱の各モジュールはすべて316 Lステンレス鋼の材質で、一般的な溶媒作用に耐えることができる。しかし、塩化物を含む溶媒は腐食性があるので、腐食を避けるためにカラムや接続管内にこのような溶媒を長時間保管することはできないので注意して使用しなければならない。

b 、柱充填剤：

液体クロマトグラフィーカラムの分離作用は充填剤と流動相の間で行われ、カラムの分類は充填剤の種類に基づいている。正相柱：シリカゲルを柱とするフィラーが多い。外形によって非晶質と球型の2種類に分けられ、その粒子径は3〜10μmの範囲内である。もう1つの正相フィラーは、シリカゲル表面結合−CN，−NH 2などの官能基、いわゆる結合相シリカゲルである。反転カラム：主にシリカゲルを基質とし、その表面にオクタアルキル官能基（ODS）を結合した非極性フィラー。無定型と球型の区別もある。

一般的に使用される他の反転フィラーには、結合C 8、C 4、C 2、フェニルなどがあり、その粒子粒径は3 ~ 10μmの間にある。充填剤の要件

一般的なカラム充填剤は化学結合シリカゲルである。逆位相クロマトグラフィーシステムには非極性充填剤が使用され、オクタデシルシラン結合シリカゲルを一般的に使用し、オクチルシラン結合シリカゲルやシアノ結合シランやアミノ結合シランなどの他のタイプのシラン結合シリカゲルも使用されている。正のクロマトグラフィーシステムには極性充填剤が使用されており、一般的な充填剤にはシリカゲルなどがある。イオン交換クロマトグラフィーシステムはイオン交換充填剤を使用する、分子排除クロマトグラフィーシステムには、ゲルや高分子多孔質微小球などの充填剤を使用する、エナンチオマーの分離には通常、キラル充填剤が用いられる。

充填剤の性能（担体の形状、粒子径、孔径、表面積、結合基の表面被覆度、炭素含有量、結合タイプなど）及びカラムの充填は、供試品の保持挙動と分離効果に直接影響する。孔径が15 nm（1 nm=10Å）以下のフィラーは分子量が2000未満の化合物の分析に適しており、分子量が2000を超える化合物は孔径が30 nm以上のフィラーを選択しなければならない。分析カラムの充填剤の粒径は、別途規定がある以外は、一般に

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3μm ~ 10μmの間。粒子径がより小さい（約2μm）充填剤は微径柱（内径約2 mm）の充填によく用いられ、微径柱を使用する場合、輸液ポンプの性能、注入体積、測定池体積とシステムのデッド体積などはそれと一致しなければならない。必要に応じて、クロマトグラフィー条件も適切に調整する必要があります。その測定結果に論争が生じた場合、品種本文に規定されたクロマトグラフィー条件の測定結果を基準としなければならない。

温度の要件

シリカゲルを担体とする通常の結合固定相の使用温度は通常35℃を超えず、分離効果を改善するためにカラムの使用温度を適切に高めることができるが、60℃を超えてはならない。

移動相の要件

移動相のpH値は2 ~ 8の間に制御すべきである。pH値が8より大きい場合、担体シリカゲルを溶解させることができ、pH値が2未満であると、シリカゲルに結合した化学結合相が加水分解しやすくなる。クロマトグラフィーシステムにおいてpH値が8より大きい流動相を使用する必要がある場合、高純度シリカゲルを担体として使用し、表面被覆度が高い結合シリカゲル充填剤、被覆ポリマー充填剤、有機−無機ハイブリッド充填剤または非シリカゲル充填剤などのアルカリ耐性充填剤を選択しなければならない。pH値が2未満の流動相を使用する必要がある場合は、体積側鎖が大きく空間抵抗保護作用をもたらすジイソプロピル基またはジイソブチル基置換オクタデシルシラン結合シリカゲル充填剤、または有機−無機ハイブリッド充填剤などの耐酸性充填剤を選択する必要がある。

注意事項

カラムのカラム効果と保護カラム

新しいカラムを手に入れるときは、まずそれを見て説明し、それからカラム効果を測定し、定期的にカラム効果を測定し、新しいカラム上に得られたクロマトグラムを保持し、条件を記録し、定期的に測定器のスペクトルバンド幅を測定しなければならない。オンラインモニタリングに適用する場合、カラムに対してオンラインでの物理的保護と化学的保護を提供します。例えば、オンラインフィルタ、自己充填剤保護カラム、予備装填保護カラムなどを取り付けることができます。ワイヤフィルタの役割は柱頭に粒子が積算されるのを防止することであり、利点は柱効果にほとんど影響しないことであり、高い柱効果が必要なときによく使われる。常に交換される消耗品はフィルタコアとガスケット保護柱の役割は柱が化学的に汚染されるのを防止することである。欠点は、多数の保護カラムがカラム効果に影響を与えることであり、特にマイクロカラムを使用する場合、一般的な自己充填材の保護カラムがよく使用されていることである。最近新しく出たいくつかの保護カラム、例えばS e n t r y-g u a r d保護カラムは、高品質、高効率の充填剤、分析カラムの効果を増加させ、汚れたサンプルに対する荷重能力が大きく、保護カラムの寿命を延長することができ、手はジョイントを締め付けることができ、設置時に道具を必要とせず、時間を節約し、コアを交換することができ、さまざまな異なる充填剤を採用することができ、主に非常に汚れた非常に複雑なサンプル本底、例えば生物化学サンプル、環境サンプルと食品など、あるいはあまり多くの圃場相抽出をしたくなく、カラムの効果を下げたくないなどの状況に適している。

カラムのクリーニング

作ったサンプルに対して十分な理解を持って、このサンプルの溶出能力zuiの強い流動相で洗浄して、シリカゲルカラムに対して、先にメタノールで極性不純物を溶出して、それから乾燥したジクロロメタンとn-ヘプタン1 0-2 0 O r aLで順次活性化して、結合と相カラムに対して、普通はメタノール1メタノール1水で順次洗浄して、各カラムには特定の洗浄方法があって、必ずその使用説明を見なければならない

カラムの保存

保存前に不純物と塩を除去し、適切な保存溶媒を採用し、クロマトグラフィーカラム床の枯渇を回避し、機械的振動を回避し、細菌の成長を防止し、保存温度に注意する。

トラブルシューーティング

1、柱圧が高すぎる

2

微粒子詰まりの可能性がある.柱床の膨張、不可逆吸着、細菌の成長などによるもの。ダンパー閉塞、インジェクタ閉塞、管路又は接続口閉塞などのシステム逆圧の問題である可能性もある.オンラインフィルターが不潔、圧力センサーが不正確など。

2、柱効果が低い

おそらく、カラムが汚染され、フィルタ片の部分的な詰まり、カラム内の死の体積、例えば移動相のpH値または組成が不適切であることによる固定相損失である可能性がある。移動相の急激な変化により固定相が物理的に損傷し、機械的振動により固定相に亀裂が生じ、柱床が収縮したり枯れたりする。

機器の接続の問題の可能性もあり、注入器、検出器、管路、保護柱とオンラインフィルタなどが接続されているかどうかを真剣に検査し、カラムのバランスが取れていない、注入量が大きすぎるなどの問題の可能性もある。

3、繰り返し性が悪く、ピークが出ず、回収率が低い

カラムの汚染、移動相のpH値または組成の不適切による固定相損失、試料溶媒の違いまたは試料自体の不安定性、固定相の極性が強すぎる、または移動相の極性が弱すぎた可能性がある.あるいは非特異的吸着が発生する。勾配実験時の平衡時間不足、温度変動、流動相組成変化、試料溶媒の違い、試料安定性の悪さ、方法の開発の悪さ、緩衝液の酸塩基度の不適切または緩衝能力の不足も考えられる。

ライン内（溶剤ボトルからポンプ入口まで）に気泡がなくなるまで、切替通路は使用するすべての通路に気泡がなくなるまでPurgeを続けます。

10、Pumpアイコンをクリックして、パラメータ設定メニューが現れて、Pump Controlオプションをクリックして、Offを選択して、Okをクリックしてポンプを閉めて、Purge valveを閉じます。

11、Pumpアイコンをクリックし、パラメータ設定メニューが現れ、Setup pumpオプションをクリックし、Pump編集画面に入り、Flow：1.0 ml/minを設定する。

12、ポンプの下のボトルアイコンをクリックして、図のように（二元ポンプを例にして）、溶媒の実際の体積とボトルの体積を入力します。ポンプ停止の体積を入力することもできます。「Ok」をクリックします。