1範囲：本基準は医薬工業無菌室と清浄区における浮遊菌の試験条件と試験方法を規定している。

本基準は医薬工業の無菌室と清浄区、無菌室または局所空気清浄区域（清浄作業台を含む）の浮遊菌の試験と環境の検証に適用する。

2引用基準：GB/T 16293？2010

医薬品生産管理規範（1998改訂）付録。

3標準

せいじょうど	生微生物数/m 3
レベル100	5
10000レベル	100
レベル100,000	500

4試験方法

4.1方法概要

本標本で用いた方法は計数濃度法である。すなわち、空気中に懸濁した生物性粒子を専門の培地（微生物の成長を支持できることが確認できる培地を選択）に集め、いくつかの時間と適切な成長条件下で可視コロニーカウントに繁殖させることにより、洗浄室の微生物濃度を判定する。

4.2人員の職責と訓練

無菌室のテスターは、衛生知識と基本的な微生物知識を含む無菌室テストの役割を果たすために、本トレーニングを行い、適切な資格を得なければなりません。

無菌室の試験者は生産操作の空気清浄度要求に応じた着用方法を選択しなければならず、外の服は100000級以上の領域に持ち込むことはできない。

4.3器具、補助設備及び培地

適切な浮遊菌サンプラを選択して、油のない抽気ポンプを採用して、低い気流流速と大きいサンプリング流量を含んで、培地表面の水分布が乾かされることを保証します。

本試験に必要な器具、補助設備及び培地は以下の通りである：

a）浮遊菌サンプラ、

b）培養皿、

c）高圧消毒鍋、

d）培地、

e）恒温培養箱、

4.4浮遊菌サンプラの原理

浮遊菌サンプラーは一般的に衝突法のメカニズムを採用し、スリット式サンプラー、遠心式またはピンホール式サンプラーに分けることができる。スリット式サンプラーは内部ファンによって気流を吸入し、サンプラーのスリット式平板を通じて、収集空気を緩慢な平板培地表面に噴射し、付着した生微生物粒子を培養してコロニーを形成する。遠心式サンプラーは内部ファンの高速回転により、気流がサンプラーの前部から後部に流入して流出し、遠心力の作用により、空気中の生きた微生物粒子が十分な時間で衝突した固形培養ストリップに付着し、生きた微生物粒子が培養されてコロニーを形成する。ピンホール式サンプラーは気流が金属蓋を通じて吸い込まれ、蓋の上には機械加工された特製の細孔が密集しており、ファンを通じて収集された微細な空気を平板培地の表面に直接衝突させ、付着した生体微生物粒子を培養成形してコロニーを形成する。

4.5試験要点

4.5.1測定器の測定周期に従って、定期的に測定器を測定しなければならない。検定に合格し、有効期間内の機器を使用すること。

4.5.2試験器具が測定区域に入っていない場合、必要であれば、まず表面を洗浄しましょう、或いは相応の無菌室内で準備して保管します（保護カバー或いはその他の適切なカバーで器具を保護します）。

4.5.3 100級無菌室内用紙の場合、上に透明で埃が付着しないカバーを被せ、100級無菌室内で鉛筆の消しゴムを使用してはならない。

4.5.4試験器具を使用する場合は、説明書に厳格に従って操作しなければならない。

4.5.4.1機器は電源を入れ、安定に予熱してから、説明書の規定に従って機器を校正することができ、同時にサンプリング流量を検査し、サンプリング量に基づいて時間を設定する。

4.5.4.2サンプリング口は消毒及び化学性能が安定している材料を用いて製造しなければならない。

4.5.4.3サンプリング管は漏れを厳禁し、内壁は滑らかでなければならない。

4.5.4.4サンプリング管の長さは測定点の高さによって決め、できるだけ曲げを減らすべきである。

4.6培養皿

4.6.1一般的にφ90 mm×15 mm規格のシャーレを使用する。選択されたサンプラに基づいて適切な培養皿を選択することができる。

4.6.2遠心サンプラに用いた固形培養ストリップ

4.7培地

ダイズカゼイン寒天培地（TSA）またはサーズ培地（SDA）または他のユーザに認められ、経験された培地。

4.8恒温培養箱

定期的に恒温培養箱に対して効果を行わなければならない

4.9試験ステップ、

4.9.1試験前の機器、培養皿の表面は厳格に消毒しなければならない。

4.9.1.1サンプラーが測定室に入る前に消毒室の消毒剤で滅菌し、100級無菌室のサンプラーに用いる

あらかじめ測定された部屋に置いておくべきだ。

4.9.1.2皿の外面を消毒剤で拭き取る。

4.9.1.3サンプリングする前に、サンプリング器の天蓋、回転盤及びカバーの内外面を消毒剤で消毒し、サンプリングを終了してから、カバーの内壁と回転盤を消毒剤で軽く噴射する。

4.9.1.4サンプリング口及びサンプリング管は、使用前に高温滅菌しなければならない。サンプリング管の外壁及び内壁を消毒剤で消毒する場合は、管中の残留液を捨てて乾燥しなければならない。

4.9.1.5サンプリング者は測定された清浄領域に対応する作業服を着用し、ターンテーブルに皿を入れたり交換したりする前に、両手を消毒剤で消毒したり、無菌手袋を持って操作したりしなければならない。

4.9.1.6サンプリング機器を消毒した後、まず培養皿に入れず、浮遊菌サンプラーを開き、機器中の残留消毒剤を蒸発させ、時間は5 min以上で、流量を検査し、サンプリング量に基づいて設定時間を調整する。

4.9.1.7浮遊サンプラーを閉じ、培養皿に入れ、蓋をする。

4.9.1.8サンプリング口をサンプリングポイントに設置した後、浮遊菌サンプラーを開いてサンプリングを行う。

4.10培養

4.10.1全サンプリング終了後、シャーレを恒温培養箱に逆さにして培養する。

4.10.2ダイズカゼイン寒天培地（TSA）を用いて調製した培養はサンプリング後、30℃〜35℃の培養箱で培養し、時間は2 d未満であってはならない。砂氏培地（SDA）を用いて調製した培養皿はサンプリング後、20℃〜25℃の培養箱で培養し、時間は5 dより少なくない。

4.10.3各培地は対照試験を行い、培養基本体が汚染されているかどうかを検査しなければならない。対照培養として1ロット当たり3匹のペトリ皿を選択することができる。

4.11コロニーカウント

4.11.1培養皿上のすべてのコロニーを肉眼で直接計数、標識またはコロニー計数器上に点計し、その後5〜10倍拡大鏡で検査し、漏れがないか。

4.11.2平板上に2つまたは2つ以上のコロニーが重複している場合、弁解可能な場合も2つまたは2つ以上のコロニーで計数する。

4.12注意事項

4.12.1使用前に各シャーレの品質をよく検査し、培地及びシャーレに変質、破損又は汚染がある場合は使用できない。

4.12.2培地、培養条件及びその他のパラメータを詳細に記録する。

4.12.3細菌の種類が多く、差が非常に大きいため、計数時に一般的に透過光を用いて皿面または真面をよく観察し、皿縁に成長した集落を見落とさないようにし、菌集落または培地の沈殿物の区別が必要であり、必要な時に顕微鏡で鑑別する。

5試験規則

5.1試験条件

試験の前に、無菌室関連パラメータを事前に試験する必要があります。このような試験は、懸濁粒子の環境条件を試験することができます。例えば、このような事前試験または以下を含むことができます。

a）温度と相対湿度の試験。無菌室の温度と相対湿度はその生産及び技術要求に適合する

（特に要求がない場合、温度は18℃〜26℃、相対湿度は45%〜65%に制御することが望ましい）。同時満

測定器の使用範囲を満たす、

b）室内送風量又は風速の試験の試験、又は差圧の試験、

c）フィルタの漏洩試験

5.1試験状態

静的状態と動的状態の両方をテストできます。

静的試験の場合、室内試験員は2人を超えてはならない

浮遊菌の試験前に測定する無菌室(ゾーン)は、予め消毒する必要があるか否かをユーザが決定する.

浮遊菌試験時に試験時に採用した状態と室内試験人員数を明記しなければならない。

5.3試験時間

5.3.1空態または静態a試験の場合、一方向流無菌室にとって、試験は浄化空気調節システムの正常運転時間が10分以上経過した後に開始することが望ましい。非一方向流無菌室については、浄化システムの正常な運転時間が30 min以上経過した後に試験を開始することが望ましい。静的b試験時、単方向流の清浄化は（区）であり、試験は生産作業者が現場から撤退し、10 minの自浄を経た後に開始することが望ましい、非一方向無菌室については、生産作業者が現場から撤退し、20 min自浄後に試験を開始することが望ましい。

5.3.2動的試験の場合、生産開始時間及び試験時間を記録しなければならない。

5.4.浮遊菌濃度の計算

5.4.1サンプリングポイント数とその配置

5.4.1.1サンプリングポイント数を少なくする

浮遊菌のサンプリングポイント位置はGB/T 16292-2010参照

a）作業区測点位置は地から0.8～1.5 m程度（作業面よりやや高い）。

b）送風口測定点位置は送風面から30 cm程度離れている。

c）キーデバイスまたはキー動作活動範囲に測定点を追加することができる。

5.4.2小サンプリング量

浮遊菌の1回当たりの小サンプリング量を表1に示す。

表1小サンプリング量

清潔	サンプリング量 L/回
レベル100	1000
10000レベル	500
レベル100,000	100
30000レベル	100

5.4.3サンプリング回数

サンプリングポイントごとに通常1回サンプリングされます。

5.4.4サンプリングに関する考慮事項

5.4.4.1一方向流無菌室または送風口に対して、サンプラサンプリング口は正対気流方向に向かうべきである、非一方向流無菌室では、サンプリングポートは上向きになっています。

5.4.4.2サンプリングポイントを配置する場合、少なくとも塵粒が集中している換気口をできるだけ避けるべきである。

5.4.4.3サンプリング時、試験者はサンプリング口の風下側に立って、できるだけ歩かないようにしなければならない。

5.4.4.4サンプリングプロセスの汚染と他のサンプルに対する汚染を防止するためのあらゆる措置を講じる。

5.4.4.5シャーレを検査に使用する時、シャーレの輸送或いは移動過程による影響を避けるために、同時に陰性対照試験を行い、毎回或いは各区域ごとに1つの対照シャーレを取り、サンプリングシャーレと同じ方法で操作するがサンプリングシャーレを暴露してはならず、その後サンプリング後のシャーレ（TSA或いはSDA）と一緒に培養箱内に入れて培養し、結果はコロニー成長しないこと。

5.5記録

テストレポートには次の項目を含める必要があります。

a）試験者の名前と住所、試験日、

b）試験根拠

c）試験無菌室の平面位置（必要に応じて隣接領域平面位置を表示する）、

d）試験機器及びその試験方法に関する説明：試験環境条件、サンプリングポイント数及び配置図、試験回数、サンプリング流量、或いは存在する可能性のある試験方法の変更、試験機器の検定証明書など、動的試験であれば、現場作業者の数と位置、現場運転設備と数量と位置も記録しなければならない。

e）結果：すべての統計計算資料を含む。

5.6結果計算

5.6.1計数方法を用いて各培養皿のコロニー数を得た。

5.6.2各測定点の浮遊菌平均濃度の計算について、式（1）を参照。

平均濃度（個/m 3）＝コロニー数/サンプリング量？？？？？？？？？？？？？？ (1)

例1：ある測定点のサンプリング量は400 L、コロニー数は1である場合：

平均濃度=1/0.4=2.5個/m 3

例2：ある測定点のサンプリング量は2 m 3、コロニー数は3である場合：

平均濃度=3/2=1.5個/m 3

5.7結果評価

5.7.1各測定点の浮遊菌の平均濃度は、選択された評価基準の細菌濃度に関する限界を下回っていなければならない。

5.7.2静的試験時、ある測定点の浮遊菌の平均濃度が評定基準を超えている場合、2回再サンプリングし、2回の試験結果が合格して初めて適合と判定する。

5.8日常監視

浮遊菌の監視には、無菌室の微生物濃度が制御されることを保証するために、偏差補正限度と警戒限度が一方向に平行流線を呈し、気流方向に垂直な断面上風速の気流を設定することが望ましい。定期的に微生物負荷及び消毒剤の効力を検査するべきであり、傾向分析ではない。静的および動的な監視には、この方法を使用できます。

浮遊菌のサンプリング頻度が次の場合は修正すべきことを考慮し、以下を評価する場合は、他の項目の検査頻度も確定しなければならない：

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-----------生産期間中、空気浄化システムはいかなる重大な修理を行う、

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--------------消毒規程の変更、

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--------------生産設備に重大な修理または設備の追加がある場合、

――――――無菌室構造領域の分布に重大な変動があった場合。

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