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浦東新区金科路2517号A棟中国コア体験センター
サイマー飛クロマトグラフィー及び質量分析
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2025年6月の初日、ボルチモアで開催された2025年ASMS大会で、サイマーフライは今年の新製品シリーズを発表した。その中でThermo Scientific™ Orbitrap™ Excedion™ Proは命名されたサイマー飛の次世代二合一超高分解能質量分析計で、サイマー飛のこの15年の輝かしい生産ラインの後任者となり、Q Exactive(QEシリーズ)およびOrbitrap Exploris(OEシリーズ)に続く3代目「Ex」ファミリーのスター製品であり、「Ex」ファミリー「workhorse」の家風を受け継ぎ、ユーザーに「Exceed」の超絶体験をもたらすことを期待している。
そこで今回はボルチモアの風に乗って、新しいThermo Scientificを体験してみましょう™ Orbitrap™ Excedion™ Proかな~
機器の先端部では、より高い伝送効率を達成し、不安定な化合物に対してより良い表現をするために、Orbitrap™ Excedion™ ProのフロントエンドはOptaMax Plusイオン源を交換しました。それは私たちが昨年発表した新世代サイマーフライ定量製品ラインのハイエンドの製品Stellarです™質量分析計に搭載されているリリースされたイオン源(Orbitrapもちょっと期待してみよう™ Excedion™ Proは将来的に定量的な領域での表現をするだろう)、より高い温度範囲でより良い噴霧安定性を提供することができる。不安定な化合物や変化しやすい修飾ペプチドセグメントなどに特化して設計されたOrbitrap Ascendに似た次世代の電動イオン漏斗を同時に搭載することで、より穏やかな先端伝送を提供し、源内損失を低減する。両者の剣は双璧をなし、互いに利益を得ている。
また、プロテオームユーザーにとって、今年は完全に新しいナノサイズイオン源OptiSprayを追加発表し、ユーザーにより優れた性能をもたらすと同時に、より簡単で便利で安定した使用体験を提供します。また、新しい納昇源区は補正、直接注入などの多種のモードを直接サポートすることができる。
Orbitrap™ Excedion™ Proは革新的なeDR(enhanced Dynamic Range)技術をもたらし、簡単に言えば、私たちは本来の1つのフルMSスキャンを2つのサブスキャンに分割し、イオンがより良い伝送と蓄積を得ることができ、気相レベル分離に相当する効果を実現し、最終的に2つのサブスキャンはソフトウェアを通じて自動スプライスして出力される。eDR技術は低存在度母イオンの信号対雑音比を著しく改善し、より良い結果信頼度をもたらし、機器LOQs/LODs性能を向上させる。このような一次スペクトルの信号増幅作用は、タンパク質グループ学の一次母イオンの感度を高め、高存在度タンパク質による同定への干渉状況を改善する。
蛋白質グループ学の定性と定量性能をさらに向上させるために、DIAの採集速度に基本的に影響を与えない前提で、同時にユーザーに目標ポリペプチドに対する定量能力を提供することができて、それをHybrid-DIA技術と命名して、そしてAdaptive RT技術を結合して、下図の実験に示すように、30 min勾配時間内で、DIA性能を犠牲にしない前提で、450個の目標ポリペプチドの定量を完成することができて、ポリペプチドの定量線形範囲は62.5 amolから1000 fmolである。
新しいOrbitrapで™ Excedion™ Proでは、我々のOrbitrap検出器はさらなる進化を迎え、Bent Trap予備蓄積技術を組み合わせて、より長い有効イオン注入時間を与えている。同時にOrbitrapのスキャンコード速度は70 Hzに達し、これによりOrbitrapは™ Excedion™ Proは短勾配及び小注入量においてより優れた表現を示した。図に示すように、9 minの超短勾配上で、6 ngから200 ngまでの注入量、Bent Trap予備蓄積技術はすべて相応の向上をもたらすことができ、さらに低い注入量の向上はより顕著である。
また、TMT-32 plexおよびTMT-35 plexサンプルについては、新しいOrbitrap™ Excedion™ Pro上のPhi-SDMアルゴリズムは、ユーザーが定量的に報告するイオンのベースライン分離を保証するために、TurboTMT 45 kおよびTurboTMT 60 kのアルゴリズムももたらす。
異なる破砕方式は実際の応用において極めて重要な役割を果たす。従来の2世代前の機器では、2 in 1製品ラインはHCDフラグメンテーション(およびソース内CID)モードのみを提供していたが、新しいOrbitrap™ Excedion™ Proでは、EThcDモードを実行しながら、EASY-Electron Transfer Dissociation(ETD)のフラグメンテーション方式を提供します。簡単に言うと、新しいOrbitrapでは™ Excedion™ Proでは、母イオンがIRMに捕捉され、ここでフルオランテン試薬と反応し、生成されたETD断片がC-Trapに戻されます。この場合、EThcDに加速するか、Orbitrapに直接入って検査するかを選択することができます。
実際の応用の中で、生物製薬分野及び蛋白質グループ学分野、ETD及びEThcDモデルは、広範な応用シーンを持っている。タンパク質配列またはポリペプチドの修飾をより精密に特性化する必要がある場合、配列被覆度、修飾部位の確証情報に対してより厳密な需要があり、ETDおよびEThcDモデルは私たちの有力な助けとなります。
まず、完全糖ペプチドのような修飾同定に直面する場合、EThcDのフラグメンテーションパターンは、糖鎖とアミノ酸との結合を保持しながらペプチド結合をフラグメンテーションし、修飾部位情報とペプチド配列情報を同時に提供することができる。
もう1つのケースはTop-downまたはMidle-down実験に由来し、単一のHCDモードに比べて、ETDやEThcDの付加などの多様なフラグメンテーションモードは、私たちのより高い配列被覆度となり、私たちの蛋白質配列の精密な特徴付けに有利である。下図のように、特にEThcDのモードでは、単純なETDモードよりも高いシーケンスカバレッジ(53%vs 40%)を得ることができます。また、新たなOrbitrap™ Excedion™ Proのmass rangeはm/z 12000まで拡張でき、これにより完全な蛋白質またはTop-down検出の両方に利益が得られる。
カバー度の面では、Top-downやMidle-downなどのタンパク質配列カバー度実験のほか、免疫ペプチド群学などのポリペプチドレベルの同定にも利益がある。
配列被覆度の助けを除いて、denovoやpeptide mappingなどの実験では、IとLの分解、DとisODの分解など、いくつかのアミノ酸配列の実証がしばしば必要であり、これらはETDのフラグメンテーションパターンで確認することができる。
総合的には、今年のセマー飛の新しいOrbitrap™ Excedion™ Pro質量分析計は、より速いスキャン速度、より良い感度、新しいeDRおよびHybrid-DIA技術、ETD、EThcDフラグメンテーションモード、m/z範囲の拡張などの改良をもたらしてくれました。私たちは新しいOrbitrapを期待しています™ Excedion™ Pro質量分析計は私たちにより効率的で迅速で正確な蛋白質定性定量をもたらし、生物製薬特性評価、Top-downなどの高分子実験により優れた実験結果をもたらすことができる。