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毛細管電気泳動計の技術原理及び生物高分子分離への応用
日付:2025-07-04読み:0

毛細管電気泳動計(CE)は高圧直流電場を駆動力とし、毛細管を分離通路とする液相分離技術であり、その核心原理は荷電粒子の電場中の移動速度の差に基づいて高効率分離を実現する。毛細管電気泳動システムでは、内径20 ~ 200μmの石英毛細管内に緩衝液を充填し、10 ~ 30 kVの高圧を印加すると、荷電粒子は電界作用下で移動し、その移動速度は電気泳動移動度(分子電荷、大きさに相関)と電気浸透流(EOF)によって共同で決定される。電気浸透流は毛細管内壁のシリコンヒドロキシル基の解離によって発生した負の電荷に源を発し、緩衝液中の陽イオンを吸引して電気二重層を形成し、高圧下で液体全体を陰極へ流動させ、その速度は通常電気泳動流動度より一桁大きく、分離の主要な駆動力となる。正帯電した粒子は電気浸透流と同方向に移動するために最初に流出し、中性粒子の次は負帯電した粒子が最後に流出し、成分分離を実現した。

生物高分子分離の分野では、毛細管電気泳動計が優位を示している。その高分解能は、単抵抗性薬物の電荷変異体を毛細管領域帯電泳動(CZE)によって分離したり、毛細管等電気集束(CIEF)によって等電点差がわずか0.03のタンパク質変異体を分離したりするなど、タンパク質の電荷異性体を区別することができる。核酸分析に対して、CEは塩基、ヌクレオチドの高感度検査を実現でき、DNA配列測定、PCR産物分析及び蛋白質-DNA相互作用研究を支持する。また、ミセル電気毛細管クロマトグラフィー(MEKC)は界面活性剤を添加することによりミセル相を形成し、帯電と中性分子を同時に分離することができ、アミノ酸、薬物などの小分子のキラル分離に適している。従来の液体クロマトグラフィーに比べて、CEはサンプルの使用量が小さく(nL級)、分析速度が速い(数分から数十分)という特徴があり、しかも相を固定する必要がなく、クロマトグラフィーカラムの老化問題を回避し、生物製薬、遺伝子工学などの分野の分析ツールとなっている。