細胞環境イメージングシステムはリアルタイムで細胞の成長状況、形態変化及び代謝活動などを監視することができ、科学研究者が細胞の生理状態と反応をより正確に理解するのを助ける。画像データを定期的に記録し分析することにより、細胞毒性、栄養不足、病原体感染などの異常状況を適時に発見することができ、さらに相応の措置を取って細胞培養条件を最適化したり、問題を解決したりすることができる。
細胞環境イメージングシステムの基本的な動作原理:
1.光学イメージング技術:細胞環境イメージングシステムは倒置顕微鏡構造を多く採用し、裏打ち集光鏡、対物レンズなどの光学部品を集積した。これらのコンポーネントは協働して、光が観測された細胞サンプルに正確に照射され、反射または透過された光を集めて、鮮明な画像を形成することができるようにします。同時に、高感度のカメラを結合すると、光信号をデジタル画像に変換し、明場、蛍光及びレリーフ効果などの多種のイメージングモードをサポートし、それによって異なる実験需要を満たすことができる。
2.蛍光標識と動態観察:特定の蛍光染料を使用することにより、細胞中の特定のタンパク質または細胞器を標識することができる。蛍光顕微鏡技術を利用することで、細胞の活動を静的な「スナップショット」から動的な「映画」に変えることができ、分子輸送、器官elles間の相互作用など、細胞内部の活動状況をリアルタイムで見せることができる。
3.自動化制御と環境維持:自動化制御システムも搭載し、温度、湿度、二酸化炭素濃度などの環境パラメータを正確に調節でき、細胞に安定かつ適切な成長環境を提供する。これは実験過程における細胞の活性を保証するだけでなく、環境要因の変化による干渉を減少させ、実験の正確性と信頼性を高めることができる。
細胞環境イメージングシステムの使用上の注意:
1.水銀灯の使用規範:水銀灯スイッチは頻繁に繰り返しオンにしないでください、2回のスイッチの間の間隔は30 min以上に達しなければならなくて、さもなくば水銀灯の寿命と性能に影響する可能性があります。
2.環境温度制御:顕微鏡室は低温環境を維持し、安定した温度は計器精度と細胞状態の維持に役立ち、温度変動による誤差を減少する。
3.遮光防振措置:実験中は遮光に注意し、光線が細胞に損傷を与えたり、実験結果を妨害したりするのを防止し、同時に振動を回避し、振動により画像がぼやけたり、焦点がずれたりする可能性があるため、撮像品質に影響を与える。
4.培地選択の要点:サンプルを準備する際に使用する培地処方は適切な栄養物質を含有して細胞成長発育を促進するだけでなく、pH値、緩衝能力、浸透圧などの要素を考慮する必要がある。不適切な培地は細胞発現、表現型及び外観挙動に影響を与える。ノンフェノールレッド培地を使用し、背景信号を低下させるために血清濃度を低下させることを提案した。
5.無菌操作の要求:細胞収集などの操作過程において、無菌操作を厳格に実行し、汚染を防止しなければならない。外来粒子や細胞破片は画像品質を妨害し、実験の正確性に影響を与える。
6.プローブ最適化の必要性:本実験を行う前に、蛍光プローブの濃度とインキュベーション時間を最適化する。インキュベーション後の細胞活性が影響を受けないようにするだけでなく、適切な蛍光信号強度を検出できるようにしなければならない。さらに、洗浄工程を加えることにより、潜在的な背景蛍光を低減することができる。
7.環境条件の安定:イメージング実験の全過程において、温度、湿度、ガス(酸素と二酸化炭素)を含む、厳格に制御し、安定した環境条件を維持する。安定した環境は細胞の健康を維持するだけでなく、焦点ドリフトのリスクを下げることができる。例えば、収集設置を配置する前に、微孔板が計器台上または環境制御室に位置して熱平衡を行うことを確保しなければならない。遅延実験中に孔に媒体を添加する場合は、画像形成容器内の媒体温度と同じであることを保証しなければならない。
8.対物レンズ加熱モジュールの応用:水鏡またはオイルミラーを用いたイメージングの実験に対して、対物レンズが媒体を通じてサンプルと接触するため、対物レンズの温度はサンプルに大きな影響を与えることができ、その場合、サンプルが適切な温度環境にあることを確保するために対物レンズ加熱モジュールを配備する必要がある。
9.焦点面制御システムの利用:ソフトウェアのオートフォーカス機能(例えばbestfocus)、焦点面安定システム(AFC)と正確な固定焦点(closeloop)などの機能を十分に利用して、異なる時点ではっきりした画像を得ることができ、イメージング品質とデータの正確性を高めることを保証する。
10.遠隔監視の優位性の発揮:もし設備が遠隔監視機能を備えていれば、この機能を合理的に利用してリアルタイムに実験の進展を監視し、直ちに問題を発見し、解決し、実験の効率と成功率を高めることができる。