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レーザー共焦点顕微鏡のワークフローの紹介
日付:2025-12-21読み:2
レーザ共焦点顕微鏡レーザー走査と共役集束原理に基づく高分解能光学顕微イメージング技術であり、非焦点平面の迷光干渉を排除することにより、サブ細胞級分解能の2次元と3次元イメージングを実現し、生物医学、材料科学などの分野に広く応用されている。

ワークフローは次のとおりです。

レーザー集束:単色性の良いレーザービームはサンプルの特定の焦点面に集束され、蛍光プローブを励起して蛍光を発生する。

ピンホールスクリーニング:焦点平面上の蛍光信号だけが検出器前のピンホールを通過でき、非焦点平面からの迷光がピンホールに遮られ、高い画像コントラストが得られる。

スキャンイメージング:レーザービームは点ごと、行ごとに焦点平面全体をスキャンし、コンピュータは信号を収集し、2次元画像を再構築する。Z軸に沿ってサンプルを移動することにより、一連の異なる深さのスライスを取得し、その後、サンプルの3次元立体画像を再構築することができる。

レーザ共焦点顕微鏡の主な特徴:

高分解能とコントラスト:非焦点平面干渉を効果的に排除し、横分解能は約120 ~ 200 nmに達することができ、イメージング品質は伝統的な広視野蛍光顕微鏡をはるかに超える。

3次元立体イメージング:物理スライスを必要とせずにサンプルに対して「光学スライス」を行い、ソフトウェアを通じて3次元構造を再構築し、サンプルの空間形態をはっきりと表現する。

多色蛍光イメージング:試料中の異なる蛍光プローブを励起し、同じ画像上で異なるターゲット構造を区別するために、複数の波長のレーザを搭載することができる。

生細胞動態観察:サンプルに対する損傷が小さく、温度制御、湿気制御などの環境下で、生細胞内の動態生理過程を長時間リアルタイムで追跡することができる。

強大な分析能力:セットソフトウェアは画像増強、細胞計数、蛍光強度定量、共定位分析などの多種のデータ処理を行うことができる。