一、COタンパロッカ標準操作規程
設備の準備:COコンパレータの電源、ガス源(COコンパレータスチールボトル)の接続が正常であるかどうかを検査し、COコンパレータ減圧弁の圧力安定(通常0.1 ~ 0.2 MPa)を確保する。設備の電源を入れ、設定温度(例えば37℃)に予熱し、培養箱内の水皿を予熱して湿度を維持する。
パラメータ設定:細胞の需要に応じてCOタンパ濃度(通常5%)を設定し、赤外線または熱伝導センサーにより校正する、設定温度範囲は一般的に室温から50℃であり、事前に予熱して温度変動を避ける必要がある、培養容器に基づいて回転数(50 ~ 300 rpm)と振幅(通常5 ~ 50 mm)を調整し、液体のスパッタを回避する、水皿に無菌蒸留水を加え、≧95%の湿度を維持した。
サンプルの配置:容器は密封(例えば通気蓋膜を使用したり、蓋を締めたり)して、COの排出と汚染を防止しなければならない、サンプルをバランスよく配置し、重心のずれがロッキングベッドの運行に影響を与えないようにする。
運転監視:定期的にCOタンパ濃度、温度が安定しているかどうかを検査し、運転パラメータを記録する、通気キャップ培養瓶または密封瓶を使用する場合は、CO浸透率をバランスさせる必要がある。
終了操作:COタンパガス源を閉じ、濃度が0%に下がってから電源を切り、センサーの損傷を避ける、水皿とキャビティを清潔にし、微生物の繁殖を防ぐ。
二、細胞培養のベストプラクティスガイドライン
細胞タイプと培地の選択:細胞タイプに応じて適切な培地を選択し、例えばDMEMは急速に増殖する細胞系に適し、MEMは多種の細胞タイプに適し、初代細胞には特殊成長因子を添加する必要がある。
細胞の回復と凍結保存:回復時に細胞を急速に解凍し、氷晶損傷を減少する、凍結保存時に凍結保護剤(例えば10%DMSO)を添加し、ゆっくりと−80℃に冷却した後、液体窒素に移行する。
無菌操作:すべての操作は超清浄テーブル内で行い、実験服、手袋、マスク、帽子を着用する。操作領域での会話や咳を避け、微生物が空気を介して伝播するリスクを減らす。
定期的な観察と記録:定期的に顕微鏡下で細胞の成長状況を観察し、細胞形態、成長密度、汚染の有無などを含む、関連データを記録して、異常をタイムリーに発見して処理する。
設備のメンテナンスと校正:定期的にCOタンパセンサーを校正し(6ヶ月ごとに一回)、濾過膜を交換する(あれば)、洗浄時に電源を切り、液体が回路システムに入らないようにする。