遺伝子発現研究では、microRNA（miRNA）はその短鎖特性（長さ約22 nt）のため、従来の蛍光定量検出に挑戦をもたらした。どのように正確にこれらの微小分子を定量するかは、科学研究者が直面している重要な問題である。現在、主流の技術経路は茎環法と加尾法に分けられており、2つの方法にはそれぞれ長所があり、どの経路を選択するかは、実験の具体的な需要にかかっている。

茎環法特殊な茎環構造を有するプライマーを用いて逆転写を行い、このプライマーはmiRNAの3'末端と特異的に結合することができ、そしてその茎環構造を通じて逆転写産物の長さを増加させ、後続のqPCR増幅に便利を提供した。その核心的な優位性は高い特異性配列が高度に同源であるmiRNAファミリーのメンバーを効果的に区別でき、単一塩基の違いさえ識別できるため、定量的な「金基準」と考えられている。

そして加尾法別の戦略を採用する：それはまずmiRNAの3'末端にPolyAポリメラーゼを通じてアデニン尾（PolyA尾）の列を加え、それから汎用的なOligo（dT）プライマーを用いて逆転写する。この方法の特徴は操作が簡単で、スループットが高い

実際の応用において、選択の鍵はバランスにある特異性とフラックス。研究目標が特定の既知のmiRNAを検証することであり、かつ家族メンバー間の微妙な違い（例えば疾病マーカースクリーニング）を区別することに対して厳格な要求がある場合、茎環法はそれによって良好の特異性はより穏当な選択である。例えば、関連するmiRNA蛍光定量測定サービスにおいて、臨床研究または基礎科学研究における単一遺伝子発現データの絶対的な正確性を確保するために、技術提供側は茎環法を優先的に推薦することが多い。

逆に、研究が前期発見段階にある場合、大量のサンプル中の数百個のmiRNAの発現スペクトルを同時に検出する必要があるか、またはサンプルRNAの総量が極めて限られている場合、加尾法はその操作フローが短く、必要なRNA量が少ない利点により、グローバルな発現データの概要をより迅速に提供することができる。

要するに、茎環法と加尾法は代替関係ではなく、補完的な技術手段である。賢明な選択は、単一のデータの正確さを追求するか、それともグループの表現の全貌を探索するかという実験目標の明確な認識に由来する。具体的なニーズを組み合わせてこそ、信頼できる結果への正しい経路を選ぶことができる。

miRNA蛍光定量測定サービス

製品紹介

Real Time PCR，即ちリアルタイム蛍光定量PCR、定量PCR又はqPCRとも呼ばれ、DNA増幅反応において、蛍光化学物質で毎回測定するポリメラーゼ連鎖反応（PCR）循環後生成物の総量の方法。測定試料中の特定DNA配列を内参又は外参法により定量分析する方法

定量PCRは操作が簡単で、迅速で便利で、感度が高く、繰り返し性が良く、汚染率が低いなどの利点があるため、医学検査、薬物治療効果審査、遺伝子発現研究、遺伝子組み換え研究、遺伝子検査、病原体検査、動植物検査、食品検査などの各種分野に広く応用されている

じっけんげんり

リアルタイム蛍光定量PCR技術とは、PCR反応系に蛍光基を添加し、蛍光信号蓄積を利用してリアルタイムにPCRプロセス全体を監視し、最後に標準曲線を通じて未知のテンプレートを定量分析する方法である

リアルタイム蛍光定量PCR技術の種類概要：DNA結合染料法、プローブに基づく化学法、クエンチング染料プライマー法

じっけんてき応用

DNA及びRNA定量、遺伝子発現検証、対立遺伝子の鑑別、SNP分離、病原体とウイルス検査、多重PCR

実験結果