フルクトース二リン酸ナトリウム注射液は低リン酸血症を治療する薬物であり、臨床では心筋虚血補助治療薬としてよく用いられる。低リン酸血症は急性の状況、例えば輸血、体外循環下で手術と胃腸外栄養を行う際に出現することができ、慢性アルコール中毒、長期栄養不良、慢性呼吸不全における炭酸枯渇などの慢性疾患にも関係する[1]。フルクトース二リン酸ナトリウム注射液の臨床応用は広範であるが、その自身の構造特徴のため、フルクトース二リン酸ナトリウムの測定は誘導後紫外分光光度法を用いることが多い、同時にフルクトース二リン酸ナトリウムの生産過程で不純物が導入される可能性があり、その類縁物質はリン酸フルクトース、リン酸グルコース、フルクトースなどであり、これらの不純物はいずれも強極性化合物であり、しかも含有量が低く、通常の逆相クロマトグラフィーと示差検出器では検出できない。紙電気泳動法を用いてフェニレンジアミンの発色を分離した後に検出する方法、および薄層クロマトグラフィー*を用いて検出する方法が報告されている[2-4]。固体複合酵素法を用いてフルクトース二リン酸ナトリウムの含有量を測定する文献もある[5]。これらの方法は操作が煩雑であるだけでなく、再現性と感度に問題がある。

本実験はイオンクロマトグラフィーパルスアンペア法を用いてフルクトース二リン酸ナトリウムと3種類の類縁物質を分離測定し、分離度が良く、感度が高く、操作が簡便である。フルクトース二リン酸ナトリウム及びその関連物質を効果的に検出する方法を確立した。

試験条件機器：ICS-5000クロマトグラフィー（Thermofisher社）、四元勾配ポンプ、EDアンペア検出器、AS-AP自動注入器クロマトグラフィーカラム：CarboPac PA 20保護カラム6を配合した。0µm、50×3 mm、（P/N：060144）CarboPac PA 20分離カラム6.0µm、150×3 mm、（P/N：060142）カラム温度：30℃、シャワー液：NaOH/NaOAC勾配リンス流速：0.4 mL/min、定量リング：20µL、検出方式：パルス積分アンペア検出（四電位波形）

サンプル前処理サンプルを適切な倍数希釈した後、0.22µmナイロンろ過膜でろ過し、ろ過液を採取して直接機械分析した。

実際のサンプルは市販のフルクトース二リン酸ナトリウム注射液を分析し、希釈後0.22µm濾過膜を経て濾過し、選択したクロマトグラフィー条件に基づいて測定し、外部標準法で定量し、そのスペクトル図は図2を参照し、分析結果は表2を参照。

結果と検討カラムの選択及びリンス液勾配条件最適化フルクトース二リン酸ナトリウムの構造中に2つのリン酸基が含まれ、アニオン交換クロマトグラフィーを用いて分離することができる。同時に、その類縁物質はリン酸フルクトース、リン酸グルコース、フルクトースであり、これらの構造にはすべて水酸基が含まれており、アンペア検出器に信号を与えることができる。クロマトグラフィーピークの分離度と保持時間の妥当性を保証するために、CarboPac PA 20の糖柱とNaOH/NaOAC勾配リンスの方法を選択した。上記クロマトグラフィー条件におけるいくつかの物質のクロマトグラフィーを下図（図1）に示す

詳しくは、サイマーフェニルイオンクロマトグラフィー