蛋白質精製システム生物実験室が蛋白質を分離、精製するための核心設備であり、クロマトグラフィー技術を結合することにより、細胞分解液、発酵液などの複雑なサンプルから高純度目標蛋白を獲得する目的を実現し、生物製薬、酵素工学、分子生物学研究などの分野に広く応用されている。
蛋白質精製システムの構成:
高圧ポンプ:正確な流速制御を提供し、クロマトグラフィーカラム中のサンプルの安定した流れを確保する。
クロマトグラフィーカラム:特定の媒体が充填され、タンパク質の物理的、化学的性質に基づいて分離を実現する。
検出器:連続波長紫外検出器、コンダクタンス検出器を集積し、多波長同期モニタリングをサポートし、リアルタイムで蛋白質の溶出過程を追跡する。
収集器:溶出ピークに対応する成分を自動的に収集し、分管収集とピーク収集の2種類のモードに分け、収集体積、ピーク閾値などのパラメータを設定し、目標蛋白損失を回避することができる。
制御ソフトウェア:クロマトグラフィー方法データベースを内蔵し、簡易プログラミング、専門家支援ソフトウェア及びデータ自動処理をサポートし、実験報告書を生成する。
動作原理:
クロマトグラフィー技術に基づいて、異なるフィラーによる生体分子の吸着差を利用して分離を実現した。例えば、ゲル濾過クロマトグラフィーは分子サイズに基づいて蛋白質を分離し、イオン交換クロマトグラフィーは電荷特性に基づいて分離し、親和クロマトグラフィーは目的の蛋白質と特定の配位子の特異的結合を利用して精製する。
日常的な運用仕様
実験前に脱イオン水で流路全体を洗い流し、クロマトグラフィーカラムを平衡にして基線が安定してから注入する必要がある、流動相は0.22μm濾過膜で濾過して脱気し、気泡の影響検出とカラム効果を避ける必要がある。
勾配溶出時、移動相のpH値または塩濃度の突然変異を回避し、標的蛋白変性またはクロマトグラフィー媒体の損傷を防止する。
実験後すぐに適切な溶離液でクロマトグラフィーカラムを洗浄し、脱イオン水または保存液でバランスを取り、密封後冷蔵保存した。