臍帯間葉性幹細胞(hUC−MSCS)は、新生児の臍帯から抽出された多潜在分化能を有する幹細胞である。臍帯由来の間葉芽幹細胞は間葉芽幹細胞の生物学的特性(表面抗原標識物、骨芽細胞、軟骨細胞及び脂肪細胞に分化する能力を持つ)を保持するだけでなく、他の由来の間葉芽幹細胞よりも安全で、より原始的で、細胞の増殖、分化及び免疫調節能力がより強い。
また、臍帯間葉充填幹細胞は材料の簡便な分離、免疫原性の低さ、道徳倫理問題の制限がなく、獲得できる細胞数が多く、大規模な標準化生産を実現できるなどの特徴を有し、広い臨床応用の将来性を持っている。本製品は厳格な品質制御と検査を経て、その安全性と有効性を確保する。
(1)細胞密度が80〜90%に達すると継代(細胞が密集してはいけないことに注意し、そうしないと分化しやすい)を行い、上清を培養し、カルシウム、マグネシウムイオンを含まないDPBSで細胞を1〜2回潤洗する、
(2)細胞の大部分が丸くなって脱落するまで、1 mLの組換え膵酵素を培養瓶に加え、消化液を全細胞に浸潤させ、37℃の培養箱に入れて1〜3 min消化し、顕微鏡下で観察する(細胞の状況に応じて)。
(3)加えて無菌遠心管に入れ、1000 rpmで5分間遠心し、3 ml MSC培地を捨てて消化を停止する。上清液を軽く均等にとり、MSC培地1-2 mlを補充してから均等に吹き付ける。
(4)継代を1:3または1:4の割合で行うか、細胞計数後に新たなフラスコに5−8×103 cells/cm 2濃度で接種し、対応する体積のMSC培地を補充した後、37℃、5%CO 2培養箱に入れて培養する。
(5)2〜3日ごとに液を交換し、2〜4日まで培養して細胞成長密度が80%前後に達するまで、後続の継代或いは凍結保存操作を行う。
ペプシン消化時間:膵酵素消化は1分程度に制御し、過剰消化による細胞損傷を避ける必要がある。
鄒接種密度鄒:底面積1:3から1:4の割合で継代し、過密或いは過疎を避ける。
鄒代次選択鄒:実験効果を保証するために低代次細胞(例えばP 2世代)を使用することを提案する鄒。
鄒専用培地鄒:成長因子を含む専用培地を用いて、細胞増殖と分化を促進する。