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Mesa Labs
多チャンネルポリペプチド合成装置によるアルツハイマー薬の開発支援
日付：2025-01-08読み：1
ヒトβ−アミロイド1−42（図1）はアルツハイマー病（AD）患者の脳堆積プラークの主要成分である。AD病理学、診断ツール、および潜在的薬物の日常的な研究では、β−アミロイドを断続的に供給する必要がある。しかし、C末端の高疎水性、および配列予備堆積による樹脂上凝集のため、β−アミロイド（1〜42）は従来の固相ポリペプチド合成（SPPS）による製造が困難であることが報告されている。β−アミロイド自動合成の最新の進展としては、赤外線加熱と新しいカップリング剤の組み合わせが挙げられ、より短いサイクル時間でより良好に難疎水性ペプチドを合成することができる。本文はSymphony®X 24チャネルポリペプチド合成装置は、異なる合成方法におけるβ−アミロイドの合成効率を平行に探索した。
Rink Amide ChemMatrixの使用™ （0.47 mmol/g）とR TentaGel™樹脂（0.19 mmol/g）、PurePep™試薬：HDMA/OxymaPure™またはHDMC/OxymaPureとDIPEAとFmocアミノ酸（1：1：1：2）をSymphony®X合成計上で、10倍過剰、50µmol規模の条件でポリペプチドを合成した。2つの合成方法をテストしました：
方法A：脱保護2 x 3 min、カップリング2 x 5 min、25°C。
方法B：脱保護2 x 30 s、90°C、カップリング2 x 1 min、90°C、赤外線加熱。
Symphony Xポリペプチド合成器は機能が柔軟で、5種類の独立したβ-アミロイド合成条件を同時に試験することができる。HDMA（表1）とHDMC（表2）はそれぞれOxymaPure試薬と組み合わせ、Rink ChemMatrixまたはR TentaGel樹脂を用いて、遅い方法Aでβ−アミロイドを合成し、得られた粗製品の純度は類似していた。最高純度はHDMA/OxymaPure試薬とRink Amide ChemMatrix樹脂の組み合わせに由来する（図2）。
温度（90°C）を上昇させ、反応を加速させた（方法B）後、HDMA/OxymaPure/DIPEA試薬とRink Amide ChemMatrix樹脂を組み合わせた粗純度は33.9%であった。加速方法＋高温＋HDMAの組み合わせの合成純度は低速方法（表1）に近い。
表1.HDMA/OxymaPure/DIPEA試薬を用いて方法Aによってβ−アミロイドを合成し、粗製品の純度と収率を得た。
表2.HDMC/OxymaPure/DIPEA試薬を用いて方法Aによってβ−アミロイドを合成し、粗製品の純度と収率を得た。
12-るつぼ-アミロイド-4.940
分
1
Symphony Xポリペプチド合成装置を使用して、24 h（常温）または17 h（90℃）内で同時に24種類の合成条件を評価し、装置上で自動ペプチド鎖切断を完成することができる
2
6種類の異なる合成条件（温度、樹脂とカップリング試薬の組み合わせ）を評価し、疎水性ペプチドの純度と収率の最適な合成条件を初歩的に確定した
3
新規ポリペプチド試薬HDMAを用いて、高速方法と赤外線加熱（90°C）により、Symphony Xポリペプチド合成計上でβ−アミロイド（1−42）−NHの合成に成功した2
4
これに基づいて、β−アミロイドなどの疎水性長鎖ペプチドの合成をさらに最適化することができ、カップリング時間を短縮し、新しいカップリング剤の組み合わせを変更することを含む
