一、日常操作規範
試薬の準備と検査
試薬瓶(例えばアセトニトリル、活性剤、酸化剤)の密封が良好であることを確保し、アルゴンガス圧力の安定を維持し、外気の進入が合成効果に影響することを防止する。
合成前に試薬の残量を検査し、直ちに空き瓶を交換し、試薬不足による合成中断を回避する。
シーケンス入力とパラメータ設定
コンピュータ支援設計ソフトウェアを通じて目標DNA配列を入力し、コドン選好性、二次構造及び制限酵素部位を考慮する。
合成ステップ(例えば、脱保護、結合、閉鎖、酸化)が正しいかどうかを確認し、終了方法(例えば、TritylOnAutoが5'-DMT基を保持して後に精製する)を選択する。
合成プロセスの監視
起動前にStartColumn手順を実行し、合成カラムの位置が正しいかどうかを確認します。
合成中にコンダクタンスフローセルを用いてDMTカチオン放出量をモニタリングし、反応の進行状況を判断した。
温度、圧力などのパラメータが正常範囲内にあるかどうかを定期的にチェックします。
せいぶつしょり
合成完了後、固相担体から生成物を切断し、OPC、PAGEまたはHPLCで精製して短い断片と塩イオンを除去した。
精製後の生成物は分装保存し、繰り返し凍結融解を避ける。
二、日常メンテナンスのポイント
栓「O」リング
月に1回検査し、毎年少なくとも1回は交換する。白色沈殿が発生したら、アセトニトリル綿棒で洗浄する。
交換時に止血鉗子で古いリングを取り、プラグに粒子がないことを確保した後に新しいリングを取り付け、圧力試験を行う。
リザーバボトルと管路
リザーバを清潔に保ち、アルゴン圧力と管路気密性を定期的に検査する。
合成前に新しい試薬で管路を洗浄し、古い試薬の残留干渉反応を防止する。
流路絞り弁
月に1回洗浄し、まず水の中で15分間煮沸し、メタノール超音波で洗浄し、閉塞を防ぐ。
器具の清掃と防塵
毎週湿布で外殻を拭き、通気口を避ける、高感度実験後、反応槽に紫外線ランプを照射して15分間滅菌した。
長期にわたって使用しない場合は、週に1〜2回電源を入れ、毎回約30分、部品の湿気を防ぐ。
三、よくある故障調査
合成収率が低い
原因:試薬失効、管路漏れ、合成カラム位置偏差。
解決:試薬を交換し、管路気密性を検査し、合成柱の位置を再較正する。
生成物の純度不足
原因:精製方法が不適切で、合成ステップが間違っている。
解決:精製条件を最適化し(例えばHPLC精製ステップを追加する)、合成パラメータが正しいかどうかを検査する。
計器アラームまたは中断
原因:廃液ボトルの満杯、電源変動、温度異常。
解決:廃液ボトルを空にし、定圧電源を使用して、温度センサーが故障しているかどうかを検査する。
データ異常(コンダクタンス値変動など)
原因:導電池の汚染、試薬の不純物混入。
解決:導電池を洗浄し、新しい試薬を交換し、再較正する。
四、操作上の注意事項
無菌環境:プライマー合成は汚染に敏感で、操作時に手袋を着用し、外因性DNAまたは酵素汚染を避ける必要がある。
試薬保存:アセトニトリルなどの溶剤は光を避けて保存し、活性剤と酸化剤は湿気を防ぐために密封しなければならない。
データ記録:ロットごとに合成された配列、試薬ロット番号、品質検査図譜を詳細に記録し、問題を追跡するのに便利である。