核心原則:「準備→活性化→サンプルアップ→リンス→溶出」の5段階の流れに従って操作し、複雑な調整を必要とせず、重点的に制御柱の活性化と流速を制御し、初心者は10分で把握できる。
適用場面:環境水サンプル、食品サンプル、生体液などのサンプルの目標物の濃縮と浄化(一般的な固相抽出カラムを例にする)。
一、操作前準備(2分、肝心な汚染防止)
計器検査:確認固相抽出器本体の通電、真空ポンプ(または圧力ポンプ)の接続は正常である、抽出カラムホルダ、収集管ホルダの取り付けがしっかりしているかどうかを検査し、収集管(遠心管/試験管)はホルダに対応して配置される。
試薬と材料の準備:固相抽出カラム(例えばC 18カラム、陽イオン交換カラム)、活性化溶媒(例えばメタノール)、リンス溶媒(例えば5%メタノール水溶液)、溶離溶媒(例えば純アセトニトリル)、処理対象サンプル(事前にろ過して粒子状物質を除去し、プラグを避ける)を用意する。
取り付け柱固定:固相抽出柱を計器ホルダに垂直に挿入し、下端を収集管に向ける、手動調整型機器の場合は、柱固定クリップを締め、柱体の安定した揺れがないことを確保する。
二、コア操作5ステップ(6分、正確な速度制御が肝心)
第一歩:カラム活性化(吸着部位を活性化させ、必ずやる!)
ピペットを用いて3〜5 mLの活性化溶媒(例えばメタノール)を吸引し、ゆっくりと抽出カラムに注入する。
固相抽出器の真空ポンプ(または圧力ポンプを起動)を開き、流速を1-2 mL/minに調整する(流速が速すぎると活性化が不十分になる)、溶媒が完全に流乾した後に真空ポンプを閉鎖する(カラムの乾焼を避ける)、
抽出カラムが水相互換型であれば、さらに3-5 mLの超純水でリンスし、同様に流速1-2 mL/minを制御し、乾燥後に予備する必要がある。
ステップ2:上様(目標物吸着)
前処理後の試料(通常5〜20 mL、具体的にはカラム容量を見る)を採取し、ピペットまたはサンプラを用いてゆっくりと活性化後の抽出カラムに注入する。
真空ポンプを起動し、流速を1-3 mL/minに調整し(サンプル粘度調整により、濁ったサンプルは適切に遅くすることができる)、サンプルが均一に柱体を流れ、目標物が十分に吸着することを確保する、
サンプルアップ終了後、30秒間抽気を続け、カラム内に残ったサンプルを抽気乾燥した。
ステップ3:リンス(不純物除去、目的物保持)
3-5 mLのリンス溶媒(例えば5%メタノール水溶液は、目的物の性質に応じて選択し、目的物の溶出を避ける必要がある)を吸引し、抽出カラムに注入する、
流速1-2 mL/minを維持し、リンス溶媒を流乾させ、この過程で新しい収集管を交換することができる(不純物汚染の後続溶離液を避ける)、
リンス終了後、1分間抽気し、カラム内に残っているリンス液を完全に除去した。
ステップ4:溶出(目標物収集、コアステップ)
きれいな収集管を抽出カラムの下端に合わせ、1 ~ 3 mLの溶離溶媒(例えば純アセトニトリル、目標物の完全な溶出を確保する)を吸引し、ゆっくりとカラムに注入する。
流速を0.5-1 mL/min(流速が遅すぎて効率が低く、速すぎると溶出が不徹底)に調整し、溶出液を完全に収集管に流入させる、
1回(目的物の回収率が低い場合)溶出を繰り返し、2回の溶出液を合併し、抽出を完了することができる。
ステップ5:仕上げクリーニング(機器寿命延長)
真空ポンプと計器の電源を切り、使用済み抽出カラムを取り外し、専用廃棄物容器に入れる。
超純水で抽出カラムホルダと管路(残留溶媒があれば)を洗浄し、乾いた布で拭き取る。
試薬と収集管を整理し、機器を乾燥通風所に置く。