オブジェクトの操作

ビスフェノールA親和カラム特異的に精製できる試料中のビスフェノールAとビスフェノールSは、固相担体としてカラム状アガロースゲルを採用し、アガロースゲルとビスフェノールA抗体を結合して免疫吸着剤を形成し、カラムを装着して免疫親和カラムを作製した。それは特異的にサンプル中のビスフェノールAを精製することができる。ビスフェノールA親和柱は食品や飲料などのサンプルの抽出に広く応用されており、この方法は速度が速く、操作が簡単で、正確性が高く、食品の品質と安全性を高めるのに非常に重要な役割を果たしている。

本明細書方法は親和カラム法を用いて食品中のビスフェノールを検出するAの検出方法。

GB 5009.305-2025食品安全国家標準食品におけるビスフェノールA、ビスフェノールF及びビスフェノールSの測定

ちょぞうじょうけん

親和柱は2-8°Cの条件下では、絶対に冷凍できず、賞味期限は18ヶ月である。室温（18〜30°C）での使用を推奨します。

実験溶液の調製

lメタノール-水溶液（80+20）：メタノールをはかる80mL,水20 mLを加え、よく混ぜる。

lメタノール-水溶液（40+60）：メタノールをはかる40mL,水60 mLを加え、よく混ぜる。

l盐酸溶液(10+90):はかる10 mL濃塩酸、90 mL水に加え、よく混ぜる。

lPBS溶液：将（しょう）PBS緩衝液試薬パック（品番：G 3001）を1000 mLの純水で溶解し、よく混ぜる。

解析手順

GB 5009.305-2025方法

1.0サンプル抽出

1.1肉及び肉製品、水産物、固形及び半固形乳製品（粉乳、発酵乳など）、乳幼児用調合食品

秤取試料1 g（0.01 gまで正確に）を50 mLポリプロピレン遠心管に入れ、50μL同位体内標準混合使用液を加え、振動混合後30 min静置した。水2 mL、渦振動30 sを加え、さらに5 mLアセトニトリル渦混合を加えた。混合液は15 min超音波で抽出し、4℃で10000 r/minで10 min遠心分離した。上澄み液を取ってガラス窒素ブロー管に入れ、40℃で窒素ガスで約2 mLにゆっくり吹き、8 mLPBSを加えて混合し、浄化する。

1.2卵、乳及び液体乳製品

秤取試料1 g（正確には0.01 gまで）を50 mLポリプロピレン遠心管に入れ、50μL同位体内標準混合使用液を加え、振動混合後30分間静置した。5 mLアセトニトリルを加え、渦混合後、超音波で15分間抽出し、4℃で10000 r/minで10分間遠心分離した。上澄み液を取ってガラス窒素ブロー管に入れ、40℃で窒素ガスで約2 mLにゆっくり吹き、8 mLPBSを加えて混合し、浄化する。

1.3穀物及び乳幼児用穀類補助食品

秤取試料1 g（0.01 gまで正確に）を50 mLポリプロピレン遠心管に入れ、50μL同位体内標準混合使用液を加え、振動混合後30 min静置した。メタノール−水溶液（80＋20）10 mLを加え、渦振動30 s、超音波で15分間抽出し、4℃で10000 r／min遠心分離10分間。上澄み液を取ってガラス窒素ブロー管に入れ、40℃で窒素ガスで約2 mLにゆっくり吹き、8 mLPBSを加えて混合し、浄化する。

1.4野菜、果物

秤取試料1 g（0.01 gまで正確に）を50 mLポリプロピレン遠心管に入れ、100μL塩酸溶液（10+90）を加えて混合し、さらに50μL同位体を加えた素内標準混合使用液、発振混合後30 min静置した。5 mLアセトニトリルを加え、渦振動30 s、超音波抽出15 min、4℃10000 r/min遠心分離10 min。上澄み液を取ってガラス窒素ブロー管に入れ、40℃で窒素ガスで約2 mLにゆっくり吹き、8 mLPBSを加えて混合し、浄化する。

1.5飲み物

秤取試料1 g（0.01 gまで正確）を2 mLポリプロピレン遠心管に入れ、50μL同位体内標準混合使用液を加え、振動混合後30 min静置した。10000 r/min遠心分離10 min。上清液を50 mLポリプロピレン遠心管にとり、10 mLPBS溶液を加えてよく混ぜ、浄化する。

注：清澄試料（例えば純浄水、ミネラルウォーターなど）は遠心分離せず、直接PBSに加えて混合することができる。

2.0試料浄化

2.1親和柱の活性化

免疫親和性カラムを10.0 mLシリンジ下。圧力を調節して、カラム保護溶液を約2 mL/min（1滴/秒）の流速でゆっくりと免疫親和カラムを通過させ、少量の空気がカラムを通過するまで。正確に5 mLの親和カラム活性化液（親和カラム製品標準配合）を採取して親和カラムをリンスし、流速は1滴/秒で、少量の空気がカラムを通過するまで。5.0 mLの純水でカラムを1回リンスし、流出液をすべて捨て、10.0 mLのpH 7.4 PBS溶液でカラムをリンスし、流速は1滴/秒で、最後の2-3 mL溶液がカラムに充満したら、加圧を停止し、栓で底部の流出口を塞ぎ、使用を待つ。

注：ビスフェノールをさらに高めるためにA免疫親和柱の浄化と吸着効果、この親和柱は使用前に活性化処理が必要である。活性化後の親和柱は1時間以内に使用してください。

2.2親和柱浄化

取1.0工程の浄化すべき液はすべてカラムを通り、流速は1滴/秒で、すべての流出液を捨て、さらに10 mLの水で免疫親和カラムをリンスし、流速は1-2滴/秒で、水滴が終わったら、真空ポンプで免疫親和カラムを抽出乾燥する。メタノール1 mLを加えて溶出し、流速は1-2滴/秒で、溶出液をガラス窒素ブロー管に集め、40℃で窒素ガスでゆっくりと乾かした。0.40 mLのメタノールを正確に添加し、渦混合10 s、更に0.60 mLの水を正確に添加し、渦混合後2 mLのポリプロピレン遠心管に移し、10000 r/minで5 min遠心分離し、清液を取って液体クロマトグラフィー-直列質量分析器で測定した。

注意事項

1)取扱説明書の操作手順を勝手に変更しないで、変更が必要な場合は当社技術部に連絡して、変更が妥当かどうかを確認してください。

2)操作手順では、サンプルをカラムに通して、リンスして、溶出する時、必ず流速をコントロールして、速すぎてはいけなくて、さもなくば検査結果を低くすることができます。

3） 本実験では、プラスチック製品容器、特にPC材質プラスチック用品、実験用水はできるだけ使用してガラス容器に入れて蒸留する。

親和柱構成リスト

準備する必要がある設備及び試薬