1、用途：

免疫親和カラムは漢方薬試料液中のアフラトキシンAを選択的に吸着することができ、それによって試料に対して非常に的確な精製作用を果たし、カラム浄化後の試料液はHPLC分析または窒素吹き付け再溶解後のLC-MS/MS検査に直接使用することができる。

2、概要：

アスペルギルス毒素A（OhratoxinA、OTA）は、アスペルギルス属とアスペルギルス属のある菌種から発生する有毒代謝物であり、強い腎臓毒と肝臓毒を持つ真菌毒素であり、催奇形性、突然変異、発癌作用がある。

3、原理：

測定の基礎は抗原、抗体反応であり、抗体はカラム体内に結合し、サンプルは抽出、濾過を経た後、ゆっくりと黄土トラマイシンAを通じて親和カラムを免疫し、免疫親和カラム内毒素が抗体と結合し、その後、洗浄免疫親和カラムは結合されていない他の無関係物質を除去する。メタノールを用いて褐色アスペルギルス毒素Aを溶出し、次いで分析装置に注入して測定に用いた。

4、パッケージ構成：

各ボックスには、さまざまな規格の褐色麹菌毒素A免疫親和柱と説明書1部が含まれている。

5、必要な材料はありますが、ボックスにはありません。

5.1設備及び消耗品

--- HPLC/LC-MS/MS

----ガス制御操作フレーム

----空気ポンプ

----天秤

----高速ホモジナイザ（回転速度≧10000/min）またはロッカ

――粉砕機

――サンプリングふるい

----メスシリンダー：100 mL/10 mL

----注射器：20 mL

----ピペットまたはピペット：1 mL

----均質カップ（または250 mL栓コーンボトル）

----サンプルボトル

----メスフラスコ

5.2試薬

――メタノール（CH₃OH）：抽出過程用分析純／溶出過程用クロマトグラフィー純

----塩化ナトリウム（NaCl）：分析純

――塩酸（HCl）：分析純

――水酸化ナトリウム（NaOH）：分析純

――リン酸水素二ナトリウム（NaH₂PO₄）：分析純

――リン酸二水素カリウム（KH₂PO₄）：分析純

-----KCl：分析純

----トウェイン-20（C₅₈H₁₁₄O型₂₆）：分析純

----水（H₂O）：蒸留水または脱イオン

6、注意事項：

――使用前に、免疫親和性カラムを室温（22〜25℃）に戻す必要がある。

――親和柱は2〜8℃で貯蔵し、凍結保存してはならない。

----有効期限内に免疫親和柱を使用してください。

----親和柱内の液体を排出してから、上述の操作を行う必要があります。

----サンプリング量：必要に応じてサンプリング量を適切に増加または減少させることができ、抽出液量はそれに応じて変化することに注意する。

----カラム容量：カラム容量は200 ngであり、サンプル中の検査対象毒素の含有量を希釈倍数で割ってカラム容量より高い場合、上述液の体積を適切に下げ、再検査する必要がある。

----pH：親和カラムのサンプル溶液のpHは6～8の間であり、この範囲を外れると塩酸または水酸化ナトリウムでpHを調整する必要がある。

――機械的検査時の溶媒と流動相の一致は溶媒効果の影響を取り除くことができる。

----黄土アスペルギルス毒素は発癌性があり、手袋マスクなどの防護具を着用して操作しなければならない。

――使用済み容器及び標準品溶液を次亜塩素酸ナトリウム溶液（5%V/V）で一晩浸漬する。

7、試液の調製：

7.1抽出液

70%メタノール−水溶液（Vメタノール：V水＝70：30）：メタノール700 mLをとり、脱イオン水を加えて1 Lに定容する。

7.2リン酸塩緩衝液（略称：PBS）

塩化ナトリウム8.00 g、リン酸水素二ナトリウム1.20 g（または十二水リン酸水素二ナトリウム2.92 g）、リン酸二水素カリウム0.20 g、KCL 0.20 gを秤量し、水900 mLで溶解し、塩酸でPHを7.0±0.1に調整し、水を加えて1000 mLに希釈した。

7.3リン酸塩吐温緩衝液（略称：PBST）

1 mLの吐温-20をとり、PBS緩衝液を1000 mLに希釈した。

8、サンプル処理：

――3 g±0.01 g試料（固体試料は粉砕し、そして2 mmのサンプリングふるいを通過しなければならない）、3 gの塩化ナトリウムを均質瓶に入れ、60 mLの抽出液を加える（7.1参照）、

----高速均質（≧10000 r/min）2 min、

----遠心10 min（8000 r/min）、

――5 mLの上清液を取って50 mLメスフラスコに入れ、PBS緩衝液で目盛りまで希釈し、混合し、15 min遠心分離（8000 r/min）する、

――20 mLの上澄み液を採取して免疫親和柱を通過して浄化する。

希釈倍率：10

9、操作手順：

9.1上記

――免疫親和柱を取り出し、シリンジ筒の下端を親和柱に直接突き通す

方形の栓、シリンジ筒と親和柱の接続を完成し、それをガス制御操作棚に置いて固定する、

――親和柱内の液体を排出した後、ステップ8の上液を採取し、注射器筒に注入する、

――液体を1〜2滴／秒の速度で流出させる、

9.2洗濯

――液体を排出する、

――10 mLPBST緩衝液（7.3参照）、10 mL水で免疫親和カラムをリンスし、流速2〜3滴／秒；

9.3溶出

――液体が乾いたら、針筒を外し、親和柱中の液体を乾かし、1.5 mLメタノールで溶出し、溶出液を2 mLサンプリングボトルに集め、水で目盛りまで希釈し、混合する。

――0.22μm微孔フィルタで濾過した後、HPLC分析のためにサンプルボトルに移した。

*前回の液体は、サンプルの前に必ず排出されます。

10、結果の判読：

黄土麹菌毒素Aの含有量＝検出濃度×希釈倍数

11、貯蔵条件及び有効期間：

貯蔵条件：2〜8℃。

有効期間：この製品の有効期間は18ヶ月です。