藻類計数器は水体生態モニタリング、環境評価及び水産養殖などの分野の重要なツールであり、その操作規範性はデータの正確性と信頼性に直接影響する。以下にサンプルの調製、計器の調整、観測計数、結果処理の4つの核心段階から、使用の詳細を詳しく説明する。
一、サンプル収集と前処理:データ基礎を築く
サンプルは代表性を持つ必要があり、収集時に水面浮遊物と底部堆積物を避け、垂直層状サンプリング法(例えば表層、中層、底層)を用いて均一に混合しなければならない。定量分析が必要な場合は、サンプリング体積(例えば1 L)を同期的に記録する必要がある。懸濁粒子を多く含む水サンプルについては、30〜50μm孔径濾過膜による予備濾過により大型不純物を除去する必要があるが、過剰濾過による目標藻類の損失を避けることに注意する必要がある。生体と死体藻類を区別するには、最終濃度0.1%の中性赤染色液を加えると、生体細胞が赤く染まる。サンプルの保存時間は24時間を超えてはならず、低温(4℃)で光を避けて保存することで藻類の形態変化を遅らせることができる。
二、計器調整:正確に観測条件を整合する
電源を入れて10~15分予熱し、光源の安定性を確保します。藻類密度に応じて適切な計数池(プランクトン計数枠など)を選択し、高濃度サンプルを視野内細胞数≦100/視野まで希釈する必要がある。対物レンズ倍数(一般的に10×または40×)を調整し、焦点つまみを粗/微調整することにより細胞画像を明瞭に焦点を合わせる。適切な照明強度を設定する——一部の藻類(例えば藍藻)は強い光に敏感で、光源の輝度を下げて光損傷による形態変化を防止する必要がある、珪藻などの紋様構造を持つ類群は、より強い透過光が殻面の特徴を際立たせる必要がある。機器に自動スキャン機能が搭載されている場合は、スキャン速度と画像解像度を事前に校正し、漏れ計や繰り返しカウントを回避する必要がある。
三、観測と計数:標準化操作の偏差回避
「ジグザグ」形状のパスを使用して計数室全体を横断し、エッジ領域を見失わないようにします。重畳細胞は焦点距離を調節して単層に分離してから数え、区別できなければ半個体で計算する。鎖状集団(微小嚢胞藻など)またはコロイド集団(トレモロなど)については、全体を計数し、集団サイズを記録する必要がある。同定が困難な種に遭遇した場合は、顕微鏡像の保存比を撮影することができる。各サンプルは、ランダム誤差を低減するために平均値をとるために少なくとも2つの平行サンプルをカウントすることをお勧めします。単一カウント変異係数>15%の場合は、繰り返し回数を5回以上増やす必要があります。
四、結果計算と品質制御
公式「細胞密度=計数値×希釈倍数/サンプリング体積」に基づいて生データを計算した。単位換算(cells/Lなど)には特に注意する必要があります。品質制御システムの構築:①空白対照(無菌水)検査試薬汚染、②添加回収実験の検証方法の正確性、③定期的に標準粒子溶液で計数視野面積を校正する。データ記録はサンプリング時間、場所、水温、pHなどの環境パラメータを含むべきで、後続の相関性分析に便利である。
五、メンテナンスとメンテナンス:設備寿命の延長
毎回使用後、計数池の残留物を速やかに整理し、まず蒸留水で洗浄し、さらに75%エタノールで浸漬消毒した。対物レンズは鏡拭き紙に少量のアルコール混合液をつけて一方向に拭くしかない。長期間使用しない場合は電源ケーブルを抜き取り、ダストカバーをかけて乾燥環境に保管する必要がある。光源バルブの寿命を定期的にチェックし、照明強度を安定させるために適時に交換する。電子部品は腐食性液体に接触しないようにし、故障した場合は専門家に連絡して修理しなければならない。