微生物ろ過検査は、試料中の微生物を物理的または化学的に濃縮し、さらに目的の菌種を分離および同定するプロセスである。この方法は水質検査、薬品無菌検査、食品微生物汚染分析などの分野に広く応用されている。一般的な検出対象としては、大腸菌、黄色ブドウ球菌などの細菌、カビ、酵母などの真菌が挙げられる。正確な分離と鑑定は検査結果の信頼性を確保する鍵である。
微生物ろ過と分離方法
2.1サンプル前処理とろ過
微生物濾過は通常膜濾過法（MembraneFiltration、MF）を採用し、液体サンプル（例えば水、飲料）に適している。手順は次のとおりです。
1.サンプルの製造：均質化液体又は固体サンプル（例えば食品は均質希釈する必要がある）。
2.濾過：0.22〜0.45μm孔径の濾膜により微生物を遮断する。
3.転移：ろ過膜を選択的または非選択的培地に貼り付けて培養する。
2.2選択的分離技術
異なる微生物は特定の培地と培養条件を採用する必要がある：
-細菌：
-大腸菌：EMB（エピメリアブルー寒天）またはマッキンケイ寒天（MacConkeyAgar）を使用する。
−黄色ブドウ球菌：マンニトール高塩寒天（MSA）を使用する。
-真菌：
−カビ及び酵母：サリドグルコース寒天（SDA）を用いて、抗生物質を添加して細菌の成長を抑制する。
微生物同定技術
3.1形態学的同定
−コロニー特徴：コロニー形態（大きさ、色、縁、表面テクスチャ）を観察する。
−黄色ブドウ球菌が黄金色、滑らかな突起を呈している場合、カビコロニーは綿毛状を呈している。
−顕微鏡観察：グラム染色（Gラム／Gラム細菌を区別）、芽胞染色など。
3.2生化学的試験
代謝特性による菌種の同定：
−オキシダーゼ試験：偽単胞菌（陽性）と腸桿菌（陰性）を区別する。
−IMViC試験：大腸菌の同定（結果パターンは＋＋－）。
−糖発酵試験：例えば乳糖発酵能力は大腸菌とサルモネラ菌を区別する。
3.3分子生物学的方法
-16 SrRNA配列決定：細菌同定の「金基準」は、属または種のレベルまで正確に行うことができる。
−PCR技術：大腸菌のuidA遺伝子などの特定遺伝子に対して増幅検査を行う。
−MALDI−TOFMS：タンパク質指紋パターンによる微生物の迅速な同定。
アプリケーションと課題
4.1実際の応用
−水質モニタリング：水中の総大腸菌群と病原菌（レジオネラ菌など）を検出する。
-薬品無菌検査：注射剤、生物製品に微生物汚染がないことを確保する。
-食品安全：食品中のサルモネラ菌、リステリア菌などを検査する。
4.2技術的課題
1.低存在度微生物検査：サンプル中の目標菌含有量が低い場合、濃縮培養が必要である。
2.雑菌干渉：複雑なサンプル（例えば糞便、土壌）は選択的培地を最適化する必要がある。
3.迅速な鑑定ニーズ：伝統的な方法は時間がかかり、分子生物学技術を普及させる必要がある。