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PCR実践ピット回避共有
日付:2025-09-28読み:1

この間皆さんと分かち合いましたPCR の反応のプロセス制御ああ、今日は話をしようPCR のの操作方法を説明します。実際の体操は全体と言えるPCR の実験の流れの中で最も見落とされやすいが重要な一環である。

次の編集者は、自分の当初の経験と心得を共有して、個人的な見方だけを代表します。

まず、システム構成(各成分は分離し、非プレミックス液)について説明する。配置する前に必要な各成分の体積を計算し、統一的に配置してから分割する。一部の学生は試薬をかわいがる可能性があり、単孔配置方式を愛している……でも実験にとっては、1回で効果的な結果をスムーズに得ることが最大の節約になります。システムの構成に際して、各成分の追加順序に注意する必要がある:先にdを追加するdH2O、残りの成分は体積の大きさに合わせて順に加えられる。排液時、吸着ヘッドが液面以下の排液に突き刺さり、液体を排出した後、元の場所で繰り返し吸引・洗浄することを厳禁する(プライマー、酵素、テンプレートは特に注意が必要)。吸着ヘッドには一定の吸着性があり、液体が排出された後、元の場所で洗浄成分が逆に吸着ヘッドに戻され、3、5回の洗浄を経て目標成分に深刻な損失を与える可能性がある。吸込ヘッド内の成分を十分に移したい場合は、位置を変えて吸込ヘッドを潤す。システムの混和にも注意が必要であり、適切なレンジのピペットでゆっくりと吹き付けることができる5-10回、ゆっくり上下を逆にして混ぜることもできます。渦発振器で混和する必要があれば、回転数はできるだけ600rpm以下、回転速度が速すぎると酵素へのダメージが大きく、低コピーテンプレートの曲線が踏み切るかどうかの差が顕著になる。システムの分割pCR反応管時、ピペット保持「1ダース1ダース吸う」操作は、気泡を生成しにくい。

実験環境について話します。よく言われているのは、超浄テーブル内に反応システムを配置し、生物安全キャビネット内にテンプレートを追加することだ。超浄台内では、通常の操作では大きな問題はありません。生物安全キャビネットはエアロゾル汚染の深刻な被災地である。バイオセーフティキャビネット内のエアロゾルは主にサンプリング後の脱着ヘッドに由来し、バイオセーフティキャビネット内は循環風を主とし、脱着ヘッド内の残留テンプレートは循環風に伴って安全キャビネット全体の内環境に充満しやすいため、実験が終わるたびに速やかに脱着ヘッドを梱包して安全キャビネットを取り出す必要がある。特に、昼に実験を完了していない午後も徹夜を続ける場合は、ゴミ箱内の捨て槍の頭をきれいにし、誰も使っていない場合は拭いてから紫外線照射をしなければならない。実験終了後のテーブル清掃及び紫外線除去はいずれも基本操作であるが、確実に実行する必要がある。

最後に、復孔実験をどのように操作すれば曲線の束形成性を高めることができるかを共有します。反応復孔を配置する場合、統一配置システムの操作を参照して、すべての反応孔のテンプレートとシステムを混合してから孔ごとに分注することができる。これにより、ジャンプ穴のリスクを効果的に下げることができます。低コピー増幅の場合(CT値33後に曲線が踏み切る)、テンプレート混入反応系の再分別は推奨されないが、この時はまだおとなしい穴ごとにテンプレートを添加したほうが穏当である(ポアソン分布の影響が明らかである)。

この時、自分が強いのが怖いと思って、待ちきれずに実験したいのではないでしょうか。まず焦らないで、仕事はその事を善くしようとして、必ず先にその器を利する。柏恒科学技術集中PCR の儀16年、さまざまな勾配を提供PCR の儀及QPCR器、あなたの研究を助けます!


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