中古高解像度質量分析計の分析方法は主にその核心機能を中心に展開し、サンプル準備、計器操作、データ収集と処理などの一環を含み、同時にその高解像度特性を結合して最適化する必要があり、以下は具体的な分析方法である:
一、サンプル準備
試料状態の適合:試料が固体であるか、液体であるか、気体であるかに基づいて、適切な処理方法を選択する。例えば、液体サンプルの純度が低い場合、濾過、抽出、濃縮などにより不純物を除去する必要がある、固体サンプルが熱安定であれば、粉末に研磨して溶解することができ、不溶性固体は誘導体化するか、固体直接注入技術を採用する必要がある場合がある、ガス試料は通常、ガスサンプリングバルブを介して直接注入されるか、吸着脱着装置を介して濃縮される。
溶媒の選択:ESI源の一般的な極性溶媒のようなイオン化源と互換性のある溶媒を選択し、EI源の一般的な非極性溶媒は、溶媒がサンプルと反応したり、干渉イオンが発生したりするのを避ける。
生物サンプルの処理:生物サンプル(例えば血液、尿)に対して、蛋白質などの高分子干渉、例えば沈殿法、遠心ろ過を除去する必要がある。
二、計器操作
起動予熱:計器説明書の順に起動し、通常はまず真空ポンプ、電源を入れ、ホストコンピュータとワークステーションソフトウェアを再開し、真空システムが動作真空度に達することを確保し、イオン源、質量分析器などの部品が安定し、予熱時間は通常30分から2時間である。
イオン化源パラメータの設定:
イオン化方式の選択:EI、ESI、MALDIなどの試料タイプに応じてイオン化方式を選択する。
パラメータ調整:イオン源温度、電離電圧、ガス流速(例えばESIのシースガス、補助ガス)などを設定する。例えば、EI源は電子エネルギー(通常70 eV)、イオン源温度(150〜300℃)を設定し、ESI源は噴霧電圧(3−5 kV)、capillary温度(200−350℃)、霧化ガス圧力を設定する。
質量分析器パラメータの設定:
スキャン範囲:スキャン範囲(m/z範囲、例えば50~1000)を設定します。
スキャン速度と解像度:需要に応じて選択し、定性的には高解像度、定量的には高速スキャンが必要である。高分解能質量分析計は、4〜5ビットの小数点以下のm/zピークを提供し、より高い確定性と信頼性で化合物を識別するのに役立ちます。
併用設備パラメータの設定:クロマトグラフィーと併用(例えばGC-MS/LC-MS)する場合、クロマトグラフィー条件(例えばカラム温度、流速、流動に比例)を同期して設定し、クロマトグラフィー分離と質量スペクトル検出のマッチングを確保する必要がある。
三、データ収集と処理
注入方法:
クロマトグラフィー注入:試料はまずガスクロマトグラフィー(GC)または液体クロマトグラフィー(LC)で分離し、それからインタフェースを通じて質量分析に入り、複雑な混合物(例えば食品、環境試料)に適用する。
自動サンプリング:ロットサンプルは自動サンプリング器により順次サンプリングでき、効率を高め、人為誤差を減らすことができる。
データ収集:ワークステーションソフトウェアの「収集」機能を起動し、計器は自動的にサンプルイオンを質量荷重比スキャンし、リアルタイム質量スペクトル図(横軸はm/z、縦軸はイオン強度)を生成する。定量分析については、まず標準品の質量スペクトル信号を収集し、標準曲線(イオン強度と濃度の関係)を確立し、それから未知のサンプルを分析する必要がある。
データ処理:
定性分析:特徴イオンピーク(分子イオン化ピーク、フラグメントイオンピークなど)を用いて標準スペクトルライブラリ(NISTライブラリなど)を比較し、化合物の種類を確定する、高分解能質量スペクトルは正確な分子量を直接与え、構造鑑定を支援することができる。
定量分析:目標化合物の特徴イオン(例えば、母イオン-子イオン対、三重四重極ロッド質量分析に適用)を選択し、標準曲線に基づいてサンプル濃度を計算する。
結果検証:分析結果(質量スペクトル図、濃度報告など)を導出し、結果検証(偽陽性を排除し、ピーク純度を確認するなど)を行う。
四、高分解能質量分析計の特殊な考慮
解像度最適化:高解像度質量分析計の核心的な利点はその高解像度にあるので、分析過程でこの特性を十分に利用する必要がある。例えば、質量が近い化合物を区別する場合、高分解能質量分析計はより正確な質量測定値を提供し、それによって化合物を正確に識別することができる。
感度対信号対雑音比:高分解能質量分析計は通常高い感度を持つが、低濃度サンプルを分析する際には信号対雑音比に注意する必要がある。信号対雑音比は、イオン源温度、イオン化電圧などの機器パラメータを最適化し、濃縮、精製などの試料処理を行うことにより向上させることができる。
メンテナンスと校正:中古高解像度質量分析計は使用時間が長いため性能が低下する問題がある可能性があるため、定期的にメンテナンスと校正を行う必要がある。例えば、注入システムの洗浄、老化部品の交換、質量荷重比精度の校正などが挙げられる。