一、全自動ポリペプチド合成装置設備の校正と準備

インストールとデバッグ

専門技術者が設備の設置と調整を行い、設備が正しく動作することを確保する。

溶剤貯液ボトルとガス管が接続されているか、機器の各部が完全であるかどうかを検査する。

合成器の電源スイッチと圧縮空気スイッチを入れ、圧力が範囲に合っているかどうかを検査する（例えば、「AIR」表の圧力は60 psiより大きく、100 psiより小さい、「N 2」表の圧力は5 psiより大きく、10 psiより小さい）。

キャリブレーションとテスト

メーカーの説明書に基づいて設備の校正とテストを行い、すべてのシステム（ポンプ、バルブ、検出器など）が正常に動作することを確保する。

温度、バーコード、反応器の混合攪拌、液体採取針、アミノ酸プッシュボトルの試験を行う、電磁弁試験化学試薬ボトルとアミノ酸ボトルの流量較正、UV制御キャリブレーション。

適切な反応容器を選択する

合成の規模に応じて適切な反応容器を選択し、容器の材料が反応物や溶媒と反応しないことを確保する。

二、試薬と材料の準備

試薬準備

合成用のアミノ酸、活性化試薬、溶媒などを用意し、すべての材料が新鮮で純粋であることを確保し、不純物の導入を回避する。

合成スキームに基づいて、必要な物質の割合で計量し、正確性を確保する。

各ラベルが貼られたリザーバに試薬を順次入れた。

レジン準備

樹脂を固相合成計に添加し、適切な溶媒（例えば、DCM）で樹脂を膨潤させ、その後、乾燥させた。

樹脂をDMFなどの溶媒を用いて洗浄し、不純物を除去し、洗浄終了後に乾燥させて予備とする。

三、合成操作

反応条件の設定

必要なポリペプチドの配列および長さに応じて、温度、圧力、時間などを含む適切な反応条件を設定する。

保護解除

前のアミノ酸の保護基を除去し、次のアミノ酸と反応できるようにする。

例えば、40%トリフルオロ酢酸/ジクロロメタン溶液を用いて脱保護し、その後ジクロロメタン、メタノールなどで洗浄する。

カップリング

新しいアミノ酸と脱保護されたアミノ酸を結合し、ペプチド結合を形成する。

最初のアミノ酸（典型的にはC末端から）を一定体積のDMFで溶解し、DCC、HBTUなどの縮合剤を加えて活性化する。

活性化後のアミノ酸溶液を固相合成計に投入し、DMFを適切な反応濃度に補充し、攪拌して縮合反応を行った。

せんじょう

未反応の物質と副生成物を洗浄し、反応の純度を確保する。

合成が完了するたびに、反応によって生成された副産物や未反応の原料を洗浄することで、不純物の蓄積を減らす必要があります。

手順を繰り返す

ポリペプチド鎖が所定の長さに達するまで脱保護及びカップリング工程を繰り返した。

四、製品の切断と精製

じゅしぶんかい

溶解液（通常はTFAなどの強酸を含む）を配置し、前置冷蔵庫で冷蔵保存する。

ペプチド樹脂を反応釜に加え、予冷した分解液を加え、攪拌反応してポリペプチドを樹脂から分解する。

分解終了後に反応液を放出し、樹脂を吸引除去しTFAなどの溶媒で洗浄した。

ポリペプチド精製

分解液を回転蒸発器に移して室温で小容量に濃縮した。

適切な沈殿剤（メチルtert−ブチルエーテルなど）を用いてポリペプチドを析出させ、遠心分離、洗浄などの工程により粗ペプチドを得た。

高効率液体クロマトグラフィー（HPLC）などの方法を用いて粗ペプチドを精製し、不純物を除去し、標的ポリペプチドを分離した。

濃縮、ろ過と凍結乾燥

精製後のポリペプチド溶液を有機溶媒をスピン蒸発除去し、濃縮ポリペプチド溶液を得た。

濃縮後のポリペプチド溶液を無菌濾過した。

濾過後のポリペプチド溶液を凍結乾燥機に入れ、適切な昇温手順を設定して凍結乾燥処理を行った。

五、品質管理と記録

反応プロセスの監視

適切な検出方法（紫外線検出、質量分析など）を用いて反応プロセスを監視し、各ステップの反応が予想通りに進行することを確保する。

記録とレポート

各ステップの操作パラメータと結果を詳細に記録し、試薬使用量、反応時間、温度、圧力などを含む。

実験報告書を生成し、合成過程における重要なデータと生成物の純度などの情報をまとめた。